本发明提供了一种犬细小病毒检测试剂盒及其应用,所述试剂盒中包含荧光标记的犬细小病毒单克隆抗体,所述犬细小病毒单克隆抗体重链可变区序列如SEQ ID NO.1所示,轻链可变区序列如SEQ ID NO.2所示。本试验标记的荧光抗体没有过度标记的现象,所制备的荧光抗体具有特异性,该荧光抗体的最适工作浓度确定为1:480。相比于对照荧光抗体而言,本发明的荧光抗体具备优越的检测特异性和灵敏性,在CPV病毒浓度为0.390625‑50μg/mL之间存在线性相关,可实现高灵敏地检测CPV病毒,更适合实际临床检测分析。