本发明公开一种用于鉴定柴胡和大叶柴胡的SNP引物,所述SNP引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示,本发明还公开一种利用所述SNP引物对中药材柴胡和大叶柴胡进行鉴定的方法,属于中药材分子鉴定领域。本发明通过对柴胡属药材的基因序列进行比对,找到一个位于核糖体ITS2序列中的SNP位点,进而针对该位点设计引物并优化扩增条件,实现了柴胡及其混伪品大叶柴胡的分子鉴定。
本发明公开了一种鉴定薄荷与留兰香的MLPA探针组,由针对薄荷与留兰香的核基因组ITS2序列差异位点设计的两条右探针和一条共同左探针组成,各探针的序列如SEQ ID NO:1‑3所示。本发明还公开一种鉴定薄荷与留兰香的MLPA方法,包括将MLPA探针组与待测样品的核基因组ITS2序列进行杂交、连接、荧光定量PCR扩增等步骤。本发明能在很短的时间内鉴别中药材薄荷及其常见混伪品留兰香,并可有效检测出掺混样品,具有特异性强、灵敏度高等优点。
本发明公开了一种鉴定中药材羚羊角及其代用品的MLPA探针组,所有探针组由三条左探针和一条共同右探针组成,所述三条左探针的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1‑3所示,所述共同右探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示,本发明还公开了一种鉴定中药材羚羊角及其代用品的MLPA方法。本发明能够在较短的时间内快速鉴别中药材羚羊角,并可有效检测出羚羊角掺混样品,判断出羚羊角中是否掺混了绵羊角/山羊角、黄羊角/水牛角。该方法具有特异性强,灵敏度高等优点,在中药材真伪鉴定领域有很好的应用前景。
本发明公开了一种同时检测中药材三种毒源真菌污染的MLPA探针,第一组探针的左侧探针LPO具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列,右侧探针RPO具有如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列,用于检测三线镰刀菌;第二组探针的左侧探针LPO具有如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列,右侧探针RPO具有如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列,用于检测黄曲霉菌;第三组探针的左侧探针LPO具有如SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列,右侧探针RPO具有如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列,用于检测赭曲霉菌。本发明能在很短的时间内同时对中药材三种优势产毒真菌进行检测,该方法具有特异性好,检测灵敏度高等优点。
本发明公开了一组用于鉴别乌龟、花龟及其杂交种的SNP标记,所述SNP标记为:第一SNP标记为碱基A或G,位于SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的第88位,第二SNP标记为碱基T或C,位于SEQ ID NO:2所示核苷酸序列的第105位,第三SNP标记为碱基C或T,位于SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的第178位,第四SNP标记为碱基C或T,位于SEQ ID NO:4所示核苷酸序列的第233位。本发明针对以上标记进行了引物设计并建立了检测方法,解决了乌龟、花龟及其杂交种鉴定困难的问题,为龟甲药材的真伪鉴别和监管提供了一种准确可靠且高效的检测手段。