本发明公开了一种葡萄糖酸钙中5种有关物质的检测方法:使用以3~5μm粒径的C18为填料的色谱柱,以含离子对试剂的水溶液为流动相,pH值2~4,流速0.5~2.0ml/min。该方法为高效液相色谱法,配有紫外检测器,同时检测葡萄糖酸钙中的葡萄糖醛酸、葡萄糖醛酸内酯、D‑葡萄糖‑δ内酯、D‑葡萄糖‑γ内酯、5‑羟甲基糠醛的含量,C18填料的色谱柱为CAPCELL PAK AQC18 4.6*250mm,3μm;所述离子对试剂为烷基磺酸钠,可供选择的有戊烷磺酸钠、己烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、癸烷磺酸钠中的一种或几种,优选地为己烷磺酸钠;所述流动相pH值为2~4,优选的为3.8;流速洗脱程序为:0至6min:0.5~0.8ml/min。该方法首次将难以分离的几种有关物质实现了良好的分离,具有灵敏度高、专属性好、操作简单等优点。