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[发明专利]一种眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30在制备细菌生长抑制剂中的应用-CN202210381217.6有效
发明人： 沈李元;朱新鹏;陈义培;刘杰;涂翰卿;卢玉平 -专利权人：江苏亢钧生物科技有限公司
申请日： 2022-04-13 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C07K14/46 文献下载
摘要：本发明涉及眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30在抗水产动物致病菌中的应用，属于生物医药技术领域。眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30分子量为4693.71Da，等电点为12.08，其氨基酸序列为KRFKKFFKKLKNSVKKRAKKFFKKPRVIGVSIPFHHHHHH；眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30在水产养殖中的应用。本发明的效果在于：眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30在抗水产动物致病菌中的应用，能对嗜水气单胞菌、蜡状芽孢杆菌、铜绿假单胞菌等多种菌种有明显抑菌效果。
一种眼镜王蛇抗菌 oh cath30 制备细菌生长抑制剂中的应用

[发明专利]一种广谱抗菌罗非鱼优良品种的选育方法-CN202210262618.X有效
发明人：陈良标;朱新鹏;涂翰卿;陈义培;沈李元 -专利权人：南通龙洋水产有限公司
申请日： 2022-03-17 - 公布日： 2023-09-29 - 主分类号： A01K61/10 文献下载
摘要：本发明提供一种广谱抗菌罗非鱼优良品种的选育方法，通过刺激群体、群体选种#imgabs0#代罗非鱼、对#imgabs1#代罗非鱼进行免疫球蛋白的分离纯化及测定、繁殖后代#imgabs2#代，筛选广谱抗菌#imgabs3#代罗非鱼，再次建立广谱抗菌#imgabs4#代罗非鱼亲鱼种群、对#imgabs5#罗非鱼进行繁殖培育#imgabs6#代、对#imgabs7#代繁殖培育#imgabs8#代并验证#imgabs9#代罗非鱼广谱性。本发明利用多种病原菌刺激罗非鱼，培育罗非鱼自有基因产生抗体免疫球蛋白，进行广谱抗菌罗非鱼的选育，选育出的广谱抗菌罗非鱼具有规格大、不易生病的优点。
一种广谱抗菌罗非鱼优良品种选育方法

[发明专利]基于两拷贝基因筛选高表达眼镜王蛇联合肽DAMP4-OH30重组菌株的方法-CN202310511064.7在审
发明人：刘杰;贾晓颖;吴杭;沈李元;朱新鹏 -专利权人：江苏亢钧生物科技有限公司
申请日： 2023-05-09 - 公布日： 2023-08-29 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了基于两拷贝基因筛选高表达眼镜王蛇联合肽DAMP4‑OH3重组菌株的方法。本发明通过毕赤酵母密码子偏好性优化设计核苷酸序列，构建眼镜王蛇联合肽DAMP4‑OH30两拷贝载体，获得两拷贝的重组表达载体，对重组酵母菌株的诱导表达，制备眼眼镜王蛇联合肽。本发明采用基因工程技术，构建串联两拷贝的质粒，以毕赤酵母为宿主，成功表达两拷贝串联蛋白，将眼镜王蛇联合肽表达产量提高多倍；本发明提供的方法具有通用性强、表达效率较高、具有生物活性、成本低、易规模化生产等优点。
基于拷贝基因筛选表达眼镜王蛇联合 damp4 oh30 重组菌株方法

[发明专利]一种高效检测毕赤酵母表达产物抑菌活性的方法-CN202211611865.2在审
发明人：李文辉;沈李元;贾晓颖;钱晓明 -专利权人：江苏亢钧生物科技有限公司
申请日： 2022-12-15 - 公布日： 2023-05-16 - 主分类号： C12Q1/18 文献下载
摘要：本发明提供一种高效检测毕赤酵母表达产物抑菌活性的方法，具体操作为将指示菌液体稀释到一定的浓度，然后制备带菌BMMY培养基筛选平板，采用pPIC9K表达载体构建表达重组质粒，再利用毕赤酵母菌株的构建方法制备含有重组目的基因的毕赤酵母菌，挑选已制备好的含有重组蛋白的毕赤酵母菌株接种于上述带菌BMMY培养基筛选平板上，置于29℃培养箱培养24h‑48h，即可对毕赤酵母表达产物抑菌活性进行检测。本发明提供的检测方法前期不需再进行液体摇培诱导表达，直接在平板上将诱导表达和抑菌活性检测同步进行，且一张平板能够同时验证多组转化子，缩短了毕赤酵母表达产物抑菌活性检测时间，提高检测效率。
一种高效检测酵母表达产物活性方法

[发明专利]一种眼镜王蛇抗菌肽抑制酶解的方法-CN202211452761.1在审
发明人： 沈李元;朱新鹏;卢玉平;龚婷婷;钱晓明 -专利权人：江苏亢钧生物科技有限公司
申请日： 2022-11-21 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： C07K14/46 文献下载
摘要：本发明提供一种眼镜王蛇抗菌肽抑制酶解的方法，具体为将眼镜王蛇抗菌肽表达液上清样品pH调到12.0，室温处理2h，然后将PH回调至7.0置于‑20℃保存，继而对眼镜王蛇抗菌肽样品抑菌活性进行测定，确定眼镜王蛇抗菌肽样品的抑菌活性。本发明利用蛋白酶不耐强碱的性能对眼镜王蛇抗菌肽进行强碱处理，使蛋白酶完全失活，防止表达液中眼镜王蛇抗菌肽受到酶解而失活，能够达到眼镜王蛇抗菌肽长期稳定保存的目的。
一种眼镜王蛇抗菌抑制方法

[发明专利]抑制蛋白酶降解眼镜王蛇抗菌肽的高温处理方法-CN202211452571.X在审
发明人：朱新鹏;沈李元;卢玉平;龚婷婷;钱晓明 -专利权人：江苏亢钧生物科技有限公司
申请日： 2022-11-21 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： C07K14/46 文献下载
摘要：本发明提供抑制蛋白酶降解眼镜王蛇抗菌肽的高温处理方法，具体为将眼镜王蛇抗菌肽表达液上清样品在100℃煮沸1h后置于‑20℃保存，继而对眼镜王蛇抗菌肽样品抑菌活性进行测定，确定眼镜王蛇抗菌肽样品的抑菌活性。本发明利用蛋白酶不耐高温的性能对眼镜王蛇抗菌肽进行高温处理，使蛋白酶完全失活，防止表达液中眼镜王蛇抗菌肽受到酶解而失活，能够达到眼镜王蛇抗菌肽长期稳定保存的目的。
抑制蛋白酶降解眼镜王蛇抗菌高温处理方法

[发明专利]杂交鲈鱼抗菌肽wb-moronecidin在抗水产动物致病菌中的应用-CN202211016420.X在审
发明人： 沈李元;朱新鹏;卢立;涂翰卿;钱晓明 -专利权人：江苏亢钧生物科技有限公司
申请日： 2022-08-24 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： C07K14/46 文献下载
摘要：本发明涉及杂交鲈鱼抗菌肽wb‑moronecidin在抗水产动物致病菌中的应用，属于生物医药技术领域。杂交鲈鱼抗菌肽wb‑moronecidin分子量为3366.89Da，等电点为11.17，其氨基酸序列为FFHHIFRGIVHVGKTIHKLVTGHHHHHH。本发明的效果在于：杂交鲈鱼抗菌肽wb‑moronecidin在抗水产动物致病菌中的应用，能对维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）、单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）等多种菌种有明显抑菌效果。
杂交鲈鱼抗菌 wb moronecidin 水产动物致病菌中的应用

[发明专利]一种腐生子囊菌抗菌肽Plectasin的基因工程制备方法-CN202211526493.3在审
发明人：李文辉;刘杰;沈李元;朱新鹏;钱晓明 -专利权人：江苏亢钧生物科技有限公司
申请日： 2022-12-01 - 公布日： 2023-03-28 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明提供一种腐生子囊菌抗菌肽Plectasin的基因工程制备方法。具体操作为根据毕赤酵母密码子偏好性，首先获得优化的密码子，再通过优化的密码子对腐生子囊菌抗菌肽Plectasin基因序列进行优化设计，其碱基基因如序列表SEQIDNo.1所示，交由生物公司合成，合成的基因获得抗菌肽Plectasin的目的基因片段，将Plectasin基因片段与pPIC9K载体连接，得到pPIC9K‑Plectasin重组载体腐生子囊菌抗菌肽Plectasin，获得的重组载体转化入宿主细胞，并对宿主细胞进行诱导表达，获得表达产物，对表达产物进行分离纯化，获得重组融合蛋白Plectasin。本发明优化后的腐生子囊菌抗菌肽Plectasin更适合毕赤酵母的表达，进行大规模发酵，适合大规模生产。
一种腐生子囊抗菌 plectasin 基因工程制备方法

[发明专利]一种杂交鲈鱼抗菌肽wb-moronecidin的基因工程制备方法-CN202211018009.6在审
发明人：朱新鹏;沈李元;卢立;涂翰卿;钱晓明 -专利权人：江苏亢钧生物科技有限公司
申请日： 2022-08-24 - 公布日： 2023-03-28 - 主分类号： C07K14/46 文献下载
摘要：本发明公开了一种杂交鲈鱼抗菌肽wb‑moronecidin的基因工程制备方法，具体为杂交鲈鱼抗菌肽wb‑moronecidin的表达载体pPIC9K‑wb‑moronecidin的构建、诱导表达产物和纯化。具体操作为：载体pPIC9K中插入了用于重组表达序列为SEQIDNo.1的wb‑moronecidin基因序列，构建表达载体pPIC9K‑wb‑moronecidin，表达载体在宿主细胞毕赤酵母中进行诱导表达，获得表达产物重组多肽wb‑moronecidin。本发明利用基因工程表达方法生产获得的抗菌肽wb‑moronecidin，具有明显的抑菌活性，降低生产成本，缩短生产周期，增加产量，能够在水产养殖业、医药行业中产业化应用。
一种杂交鲈鱼抗菌 wb moronecidin 基因工程制备方法

[发明专利]一种抑制蛋白酶降解眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30的方法-CN202211544678.7在审
发明人：卢玉平;朱新鹏;沈李元;龚婷婷;钱晓明 -专利权人：江苏亢钧生物科技有限公司
申请日： 2022-11-21 - 公布日： 2023-03-24 - 主分类号： C07K14/46 文献下载
摘要：本发明提供一种抑制蛋白酶降解眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30的方法，具体为将眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30表达液上清样品pH调到2.0，室温处理2h后，然后将PH回调至7.0置于‑20℃保存，继而对眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30样品抑菌活性进行测定，确定眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30样品的抑菌活性。本发明利用蛋白酶不耐强酸的性能对眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30进行强酸处理，使蛋白酶完全失活，防止表达液中眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30受到酶解而失活，能够达到眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30长期稳定保存的目的。
一种抑制蛋白酶降解眼镜王蛇抗菌 oh cath30 方法

[发明专利]一种提高毕赤酵母表达眼镜王蛇抗菌肽产量的诱导方法-CN202211289953.5在审
发明人： 沈李元;朱新鹏;刘杰;李雯倩;卢玉平;钱晓明 -专利权人：江苏亢钧生物科技有限公司
申请日： 2022-10-21 - 公布日： 2023-03-21 - 主分类号： C12N1/38 文献下载
摘要：本发明提供了一种提高毕赤酵母表达眼镜王蛇抗菌肽产量的诱导方法，具体诱导表达方法步骤如下：1）按照1‑15%的接种比例，将酵母种子接种至一级培养基YPD中，在29℃下振荡培养16‑18h，获得一级培养液；2）将一级培养液按照1‑15%的接种比例，转接至二级培养基BMGY中，在29℃下振荡培养16‑18h，获得二级培养液；3）将二级培养液全部转接至BMMY培养基中，开始诱导培养；4）添加甲醇1%、山梨醇0.02‑0.5%混合诱导剂进行诱导培养，诱导达到2.5后停止诱导表达，收集表达液。本发明的诱导方法能够明显提高眼镜王蛇抗菌肽的表达量，同时抑制效果明显提高。
一种提高酵母表达眼镜王蛇抗菌产量诱导方法

[发明专利]一种提高毕赤酵母表达鲈鱼抗菌肽产量的诱导方法-CN202211289954.X在审
发明人：朱新鹏;沈李元;刘杰;李雯倩;卢玉平;钱晓明 -专利权人：江苏亢钧生物科技有限公司
申请日： 2022-10-21 - 公布日： 2023-03-21 - 主分类号： C12P21/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种提高毕赤酵母表达鲈鱼抗菌肽产量的诱导方法，具体诱导表达方法步骤如下：1）按照1‑15%的接种比例，将酵母种子接种至一级培养基中，在29℃下振荡培养16‑18h，获得一级培养液；2）将一级培养液按照1‑15%的接种比例，转接至二级培养基中，在29℃下振荡培养16‑18h，获得二级培养液；3）将二级培养液按照1‑15%的接种比例，转接至BSM培养基中培养至达到1.8‑2.2；4）添加甲醇500μl、50%山梨醇50μl的混合诱导剂进行诱导培养，诱导达到2.5后停止诱导表达，收集表达液。本发明的诱导方法能够明显提高鲈鱼抗菌肽的表达量，同时抑制效果明显提高。
一种提高酵母表达鲈鱼抗菌产量诱导方法

[发明专利]一种提高鲈鱼抗菌肽wb-moronecidin诱导表达水平的培养基配方-CN202211134074.5在审
发明人：朱新鹏;卢玉平;沈李元;刘杰;李雯倩;钱晓明 -专利权人：江苏亢钧生物科技有限公司
申请日： 2022-09-19 - 公布日： 2023-03-21 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明提供了一种提高鲈鱼抗菌肽wb‑moronecidin诱导表达水平的培养基配方，培养基配方是每1000mL体系中，包括：葡萄糖20g，二水硫酸钙0.465g，硫酸钾9g，七水硫酸镁7.45g，氢氧化钾2.065g，85%磷酸13.35mL，PTM1 4mL，氨基酸10g，余量为去离子水，上述氨基酸为谷氨酸、天门冬氨酸、天门冬酰胺、谷氨酸和天门冬酰胺组合氨基酸、谷氨酸和天门冬氨酸组合氨基酸或天门冬氨酸和天门冬酰胺组合氨基酸。将含有表达质粒的毕赤酵母菌接种至上述培养基中，培养24h酵母即进入快速生长期进而可以开始诱导，本发明的培养基能够明显提高鲈鱼抗菌肽wb‑moronecidin诱导表达水平，同时抑制效果明显提高。
一种提高鲈鱼抗菌 wb moronecidin 诱导表达水平培养基配方

[发明专利]一种用于鲈鱼抗菌肽wb-moronecidin诱导表达的培养基配方-CN202211134152.1在审
发明人：刘杰;卢玉平;朱新鹏;沈李元;李雯倩;钱晓明 -专利权人：江苏亢钧生物科技有限公司
申请日： 2022-09-19 - 公布日： 2023-03-21 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明提供了一种用于鲈鱼抗菌肽wb‑moronecidin诱导表达的培养基配方，所述培养基的每1L体系中，培养基组成包括：葡萄糖20g、二水硫酸钙0.465g、硫酸钾9g、七水硫酸镁7.45g、氢氧化钾2.065g、85%磷酸13.35mL、PTM1 4mL、氨基酸10g，余量为去离子水，上述氨基酸为赖氨酸、苯丙氨酸或赖氨酸与苯丙氨酸组合氨基酸，使用本发明的培养基配方可确保重组毕赤酵母良好生长，生长18h就进入对数生长期，即可进行诱导表达；同时在诱导阶段显著提高了重组蛋白的表达水平及重组蛋白的表达量。
一种用于鲈鱼抗菌 wb moronecidin 诱导表达培养基配方

[发明专利]一种提高诱导鲈鱼抗菌肽wb-moronecidin表达效率的培养基配方及配制方法-CN202211134073.0在审
发明人： 沈李元;卢玉平;朱新鹏;刘杰;李雯倩;钱晓明 -专利权人：江苏亢钧生物科技有限公司
申请日： 2022-09-19 - 公布日： 2023-01-13 - 主分类号： C07K14/46 文献下载
摘要：本发明提供了一种提高诱导鲈鱼抗菌肽wb‑moronecidin表达效率的培养基配方及配制方法，所述培养基的每1000mL体系中，培养基组成包括：葡萄糖20g，二水硫酸钙0.465g，硫酸钾9g，七水硫酸镁7.45g，氢氧化钾2.065g，85%磷酸13.35mL，PTM1 4mL，氨基酸10g，余量为去离子水，上述氨基酸为甘氨酸、苏氨酸、缬氨酸或亮氨酸。使用本发明的培养基，利用毕赤酵母菌表达重组蛋白时，能够明显提高毕赤酵母的生长速度，生长18h后即可进入诱导阶段，显著提高鲈鱼抗菌肽wb‑moronecidin诱导表达效率，且诱导表达后得到的重组蛋白的活性和稳定性。
一种提高诱导鲈鱼抗菌 wb moronecidin 表达效率培养基配方配制方法

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