本发明涉及一株一步发酵生产低分子量透明质酸的基因工程菌及其构建方法与应用。该基因工程菌是在马链球菌兽疫亚种ATCC39920中导入透明质酸酶基因和锌离子诱导启动子PczcD。所述透明质酸酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。所述锌离子诱导启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还提供了该基因工程菌的构建方法及其在生产透明质酸钠中的应用。该基因工程菌将透明质酸钠的发酵制备和酶解过程两个过程合二为一既能实现透明质酸的发酵，又能通过诱导调节该工程菌株分泌透明质酸酶，一步酶解透明质酸，大大减少了工艺步骤，实现了直接从发酵液中制备低分子量透明质酸钠，极大的简化了工艺流程，工业化生产更为简便且节约成本。
本发明涉及一种透明质酸酶突变体、突变基因及其在制备寡聚透明质酸中的应用。该透明质酸酶突变体氨基酸序列相对于SEQ ID No.3所示序列仅存在下述突变：第110位的谷氨酸取代为赖氨酸、第409位色氨酸取代为半胱氨酸、第519位天冬酰胺取代为色氨酸、第525位丙氨酸取代为甘氨酸、第532位天冬氨酸取代为脯氨酸。本发明以肺炎链球菌Streptococcus pneumonia SP098的野生型透明质酸酶hyl为基础，选择第110位、第409位、第519位、第525位和第532位的氨基酸进行迭代饱和突变。与野生型透明质酸酶hyl相比，透明质酸酶突变体hyl‑E110K‑W409C‑D532P‑N519W‑A525G的酶活力提高了3.73倍，达到21.3×105U/mL，应用该透明质酸酶突变体进行寡聚透明质酸的生产，最高发酵产量可以达到50.5g/L。
本发明涉及基因工程领域，具体提供一种nLsA蛋白及其结构基因和应用。该nLsA蛋白为a1)或a2)：a1)氨基酸序列是SEQ ID No.2所示的蛋白质；a2)将a1)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有与a1)序列相同功能的蛋白质。本发明的nLsA蛋白相比于常用的商品化乳酸链球菌素，具有更好的杀菌效果，能在同等使用量的情况下获得更好的使用效果，有巨大的潜在应用价值。
