一种兼具谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)和超氧化物歧化酶(SOD)活性的双功能抗氧化酶及其制备方法,属于生物技术领域。涉及序列SEQ ID No1~26,其由GPX和SOD两种酶的氨基酸序列组成,既能分解SOD的底物,又能分解GPX的底物。先用基因合成法获得杂合tRNA基因,再合成或扩增GPX和SOD基因,将两者组装到同一个能够表达杂合tRNA的分泌型原核表达载体上,转化TAG工程菌,在亚硒酸钠存在下诱导表达,通过常规氨基酸进入肽链的方式将GPX的催化基团Sec引入到蛋白的底物结合部位,赋予其高的GPX和SOD活性。本发明方法简单,酶蛋白活力和产量高、稳定性好,具有高效的抗氧化功能。