本发明公开了一种植物表达载体及其应用。该载体按照包括如下步骤的方法得到:在出发表达载体pZP201的HindIII和EcoRI酶切位点间插入SEQ ID NO:4所示DNA片段,得到中间载体I;再向中间载体I中的ScaI和ScaI酶切位点间插入含有如下片段的DNA片段:LB、RB和SEQ ID NO:3所示DNA片段,得到目的表达载体。本发明载体可以方便、快捷插入目标基因,外源基因可直接通过一步克隆载体便插入到本发明表达载体中,大大简化了操作步骤,无须构建系列载体,操作简便,省时省力,降低了成本,提高了工作效率。该载体的发明可为植物基因工程育种提供技术支撑,为转基因植物的安全性评价和商业化种植奠定基础。