本发明提供一种表达载体及其高效表达和制备人胱抑素C蛋白的方法,表达载体,包括哺乳动物表达载体和CD33蛋白信号肽的编码基因,所述CD33蛋白信号肽的编码基因的序列为SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列;所述方法包括以下步骤:1)将CD33蛋白信号肽的编码基因插入哺乳动物表达载体中,得到重组人胱抑素C表达载体,所述CD33蛋白信号肽的编码基因如SEQ ID NO:1所示;2)再将所述重组人胱抑素C表达载体和宿主细胞转染,得到转基因细胞;3)再将所述转基因细胞进行表达,纯化,得到重组人胱抑素C蛋白。