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[发明专利]一种单细胞转录组测序文库的构建方法及其应用-CN202010233568.3有效
发明人：万瑛;于海礼;仇鑫;陈钢;郑子寒;倪青山;周逸文;许昊 -专利权人：中国人民解放军陆军军医大学
申请日： 2020-03-27 - 公布日： 2023-05-30 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体公开了一种单细胞转录组测序文库的构建方法及其应用。本方法包括以下步骤：在孔板中对分选的单细胞进行裂解，利用逆转录引物进行逆转录合成第一链cDNA；利用置换合成反应合成第二链cDNA；利用Tn5转座酶将双链cDNA片段化；利用PCR富集片段化的模板；利用Index PCR对富集片段进行标签标记，纯化即得到单细胞转录组测序文库。本发明利用Tn5转座酶直接对双链cDNA进行酶切，无需对cDNA进行PCR预扩增，可减少文库偏好性，获得更准确的转录组信息；同时使用Tn5转座酶能够提高建库效率，缩短建库时间。本方法建库步骤简单，可检测更多的基因，有效降低中低丰度基因dropout的比例，减少建库时间和成本，有利于在单细胞层面上进行更精细的研究。
一种单细胞转录序文构建方法及其应用

[发明专利]基于模板序列和参考细胞的TCRβ高通量测序数据校正和标准化的方法-CN202210213693.7在审
发明人：万瑛;于海礼;倪青山;邹丽云;韩清娟;陈钢;黄毅;曾聪 -专利权人：中国人民解放军陆军军医大学
申请日： 2022-03-03 - 公布日： 2022-06-07 - 主分类号： G16B30/00 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体公开了一种基于模板序列和参考细胞的TCRβ高通量测序数据校正和标准化的方法，包括如下步骤：在样本中掺入固定数目的外参细胞和固定数目的合成模板，构建TCRβ的高通量测序文库，并使用高通量测序平台进行测序；利用加入的模板序列分析扩增偏倚规律；校正碱基突变偏倚引起的测序错误；利用外参细胞对样本测序数据进行标准化；对样本中的T细胞受体进行精确定量。本发明以高通量测序的方式，采用标准化流程，通过扩增偏倚校正，测序错误校正，样本标准化，可以对TCRβ高通量测序数据的校正和标准化，最后获得精准而真实的TCRβ库分布。
基于模板序列参考细胞 tcr 通量序数校正标准化方法

[发明专利]一种基于高通量测序对TCR β进行定量的方法-CN202210222259.5在审
发明人：万瑛;倪青山;于海礼;韩清娟;邹丽云;曾聪;黄毅;陈钢 -专利权人：中国人民解放军陆军军医大学
申请日： 2022-03-03 - 公布日： 2022-05-31 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于高通量测序对TCRβ进行定量的方法，包括如下步骤：使用Trizol裂解样本，在裂解样本中加入外参细胞裂解液；提取样本和外参细胞的总RNA；利用TCRβ的C端特异性引物进行反转录；在反转录产物中加入模板；使用一组优化了序列组成和使用浓度的多重PCR引物构建TCRβ的高通量测序文库，并进行测序；利用2轮外参数据对样本中的TCRβ进行定量。本发明通过加入外参细胞，可对样本的T细胞总数进行有效估计；通过使用优化了序列组成和使用浓度的多重PCR引物，可更好的减少多重引物相互之间的干扰和扩增偏倚；通过加入模板，可帮助TCR高通量测序数据的校正和标准化，最后获得精准而真实的TCRβ库分布。
一种基于通量 tcr 进行定量方法

[实用新型]换液板-CN201921605667.9有效
发明人：万瑛;王建;周见至;倪青山;邹丽云;李全滨;王晓玲 -专利权人：重庆微浪生物科技有限公司
申请日： 2019-09-25 - 公布日： 2020-07-03 - 主分类号： G01N35/00 文献下载
摘要：本实用新型属于细胞处理技术领域，特别是涉及一种换液板。包括板体，所述板体上设有至少一个换液单元，所述换液单元包括样本槽，所述样本槽的两端连接有洗液槽，所述洗液槽和样本槽的下部通过分隔凸起隔开，所述样本槽的上部与洗液槽连通。本实用新型的有益效果是：通过设置分隔凸起将样本槽的槽底和洗液槽的槽底隔断使得样本细胞能够在样本槽内充分沉淀，减少干扰，样本槽和两个洗液槽上部连通形成液体流动通道，实现物理换液，避免在换液过程中损伤细胞。
换液板

[发明专利]一种换液方法、换液板及其在细胞染色和颗粒洗涤中的用途-CN201910911173.1在审
发明人：万瑛;王建;周见至;倪青山;邹丽云;李全滨;王晓玲 -专利权人：重庆微浪生物科技有限公司
申请日： 2019-09-25 - 公布日： 2019-11-29 - 主分类号： G01N35/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种换液方法、换液板及其在细胞染色和颗粒洗涤中的用途，其中换液方法包括如下步骤，在换液板上，向至少一个样本槽中注入混合细胞悬液或颗粒悬液并静置，使所述混合细胞悬液中的细胞或颗粒悬液中的颗粒沉降；向与所述样本槽连接的第一洗液槽和第二洗液槽中连续注入缓冲液并从第二洗液孔和第一洗液孔中连续排出缓冲液。
换液颗粒悬液缓冲液洗液槽洗液孔样本槽混合细胞颗粒沉降细胞染色细胞悬液注入混合排出悬液洗涤细胞