本发明属于生化药物检测领域,具体提供一种小牛血清动物源性成分种属的检测方法,所述动物源性成分为牛源性成分、猪源性成分或羊源性成分,所述方法包括:(1)模板DNA制备:提取样品的基因组DNA,测定浓度,稀释,作为样品模板DNA;(2)PCR扩增:取步骤(1)中所得样品模板DNA,鉴别引物为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2;或为SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4;或为SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6;(3)酶切反应:取步骤(2)所得样品模板DNA扩增产物,限制性内切酶为Dpn II酶、Mnl I酶、或Sau3A I酶;(4)琼脂糖凝胶电泳测定:取步骤(3)所得酶切产物,制胶,点样,电泳。本发明方法专属性好、灵敏度高、操作简便。