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[发明专利]一种黄瓜-酸黄瓜二体附加系的创制、鉴定方法-CN202010635664.0在审
发明人：娄群峰;李梦雪;刘昱希;陈劲枫 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2020-07-03 - 公布日： 2020-09-29 - 主分类号： A01H1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种黄瓜‑酸黄瓜二体附加系的创制、鉴定方法，属于植物生物技术育种领域。该方法首先利用黄瓜‑酸黄瓜种间杂交异源四倍体与二倍体栽培黄瓜回交两次得到黄瓜‑酸黄瓜单体异附加系，再通过黄瓜‑酸黄瓜单体异附加系自交，经分子标记方法和基因组原位杂交方法筛选出黄瓜‑酸黄瓜二体附加系。本方法操作过程简单方便，成本低廉，并首次创制出携带酸黄瓜10号染色体的黄瓜‑酸黄瓜二体附加系材料，对于挖掘酸黄瓜优异基因，进一步实现栽培黄瓜的遗传改良奠定了基础。
一种黄瓜附加创制鉴定方法

[发明专利]一个与黄瓜-酸黄瓜渐渗系抗白粉病基因共分离的分子标记SNP6-CN201810345938.5有效
发明人： 陈劲枫;张开京;李季;王星 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2018-04-13 - 公布日： 2020-08-25 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明首次公开了一个与黄瓜‑酸黄瓜渐渗系抗白粉病基因共分离的分子标记SNP6，属于植物分子育种领域，该标记正反向引物序列分别为：5′TTTCTTGTACAGGGGAAGGTGG 3′和5′TGTTTTGGTCAGGCAAAGGGT 3′。在感白粉病黄瓜品种‘长春密刺’与抗白粉病黄瓜‑酸黄瓜渐渗系‘IL52’构建的F2群体中，于SNP6位置处，在抗白粉病单株中可检测到纯合的C/C碱基，在感白粉病单株中可检测到纯合的T/T碱基或杂合的T/C碱基。本发明公开的分子标记SNP6可用于黄瓜‑酸黄瓜渐渗系抗白粉病基因精细定位和分子标记辅助育种，对于加快黄瓜白粉病抗性育种具有重要的理论和实践指导意义。
一个黄瓜渐渗系抗白粉病基因分离分子标记 snp6

[发明专利]一个与黄瓜-酸黄瓜渐渗系抗细菌性角斑病基因紧密连锁的分子标记SSR05793-CN201910045504.8有效
发明人： 陈劲枫;张开京;李季;魏义凡 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2019-01-16 - 公布日： 2020-08-04 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明首次公开了一个与黄瓜‑酸黄瓜渐渗系抗细菌性角斑病基因紧密连锁的分子标记SSR05793，属于植物分子育种领域。该标记正反向引物序列分别为：5′CCCTCTGCTGCACATTATCC 3′和5′TGCACCAAGCAATAACTTGTC 3′，在RIL(长春密刺×IL52)群体中，标记SSR05793可在抗病单株中扩增出192bp单一条带，在感病单株中扩增出204bp单一条带或192bp和204bp双条带。本发明公开的分子标记SSR05793可用于黄瓜‑酸黄瓜渐渗系抗细菌性角斑病基因精细定位和分子标记辅助育种，对于加快黄瓜细菌性角斑病抗性育种具有重要的理论和实践指导意义。
一个黄瓜渐渗系抗细菌性角斑病基因紧密连锁分子标记 ssr05793

[发明专利]黄瓜单性结实主效QTL Parth2.1的连锁分子标记及其应用-CN201910605499.1有效
发明人：李季;陈劲枫;朱拼玉;娄群峰;钱春桃;虞夏清;程春燕 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2019-07-05 - 公布日： 2020-04-07 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明公开了黄瓜单性结实主效QTL Parth2.1的连锁分子标记及其应用。黄瓜单性结实主效QTL Parth2.1的连锁分子标记Indel‑16Y‑46，其上游引物:SEQ ID NO.1,下游引物:SEQ ID NO.2。本发明所述的分子标记在全雌强单性结实黄瓜新品种分子标记辅助育种中的应用。利用本发明分子标记对Parth2.1位点选择效率为100％。基于该分子标记开发了一种全雌强单性结实黄瓜新品种的分子标记辅助育种方法，获得的全雌强单性结实的黄瓜新品种是欧洲温室型黄瓜自交系品种，有较高的产量和优良的果实品质，可直接作为改良其他品种单性结实性和全雌性的骨干亲本。
黄瓜单性结实 qtl parth2 连锁分子标记及其应用

[发明专利]抗霜霉病黄瓜种间杂种新品种的培育方法及应用-CN201811487242.2有效
发明人： 陈劲枫;张开京;李季;娄群峰 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2018-12-06 - 公布日： 2019-10-08 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明公开了抗霜霉病黄瓜种间杂种新品种的培育方法及应用。该培育方法包括以‘长春密刺’的高代自交系CCMC为母本，以黄瓜‑酸黄瓜渐渗系材料IL52为父本，进行杂交获得F1，杂种F1自交获得F2，并继续通过单粒传的方式构建F6重组自交系；通过对重组自交系群体进行4年的田间成株期霜霉病自然发病表型统计，筛选出抗性高且果实商品性较好的重组单株；利用回交及分子标记辅助选择获得dm5.2区段内基因型与IL52带型一致，而其他染色体区段为‘长春密刺’带型的单株即为抗霜霉病黄瓜种间杂种新品种。新品种具有高抗霜霉病性状和较高的产量和优良的果实品质。
霜霉病种间杂种黄瓜新品种带型单株分子标记辅助选择培育重组自交系群体父本母本高代自交系果实商品性染色体区段重组自交系方式构建果实品质成株期单粒传基因型抗性表型高抗回交性状自交应用筛选杂交田间统计

[发明专利]黄瓜单倍体植株加倍方法-CN201610883765.3在审
发明人： 陈劲枫;邓英;张璐;陶莲;陈洁;卢松;杨静 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2016-10-08 - 公布日： 2018-04-17 - 主分类号： A01H1/08 文献下载
摘要：本发明公开了一种黄瓜单倍体植株加倍方法。本发明采用特定的单倍体培养基，对黄瓜单倍体植株进行培养，在转接4代以后，70％的单倍体植株加倍成为双单倍体植株，双单倍体植株理论上完全纯合，可直接应用于黄瓜育种。为黄瓜育种提供新种质，可缩短黄瓜杂交育种年限3‑5年。本发明的原料来源广泛，成本低廉，安全有效。本发明简单易行，使用效果好。
黄瓜单倍体植株加倍方法

[发明专利]一种微型化黄瓜植株相关蛋白及其编码基因与应用-CN201611174270.X有效
发明人：娄群峰;付文苑;陈劲枫 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2016-12-14 - 公布日： 2017-10-17 - 主分类号： C12N9/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种黄瓜植株微型化相关蛋白及其编码基因与应用，该蛋白的氨基酸序列如序列表2所示，属于AAA ATP酶家族，与微管结合蛋白相关；该蛋白的编码基因如序列表1所示的碱基序列，该碱基序列若发生突变，如1058bp位的胞嘧啶(C)被胸腺嘧啶(T)取代，编码的蛋白的353位丝氨酸(Ser)变为苯丙氨酸(Phe)，这样该蛋白抑制微管细胞正常发育，使微管细胞骨架缺失，排列异常，具体在植株表型为植株微型化，突变体植株高度只有正常野生型植株高度的20％左右，果实长度也只有正常野生型果实长度的10％左右，同时叶片和种子均明显变短。该蛋白及其编码基因的应用，可以为黄瓜株型的改良和杂交育种或转基因植物的开发创造条件。
一种微型黄瓜植株相关蛋白及其编码基因应用

[发明专利]黄瓜单拷贝基因的染色体物理定位方法-CN201310409784.9有效
发明人：娄群峰;张云霞;陈劲枫;何玉华;贾利;程春燕;李季 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2013-09-11 - 公布日： 2017-01-18 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了黄瓜单拷贝基因在染色体上物理定位的方法，它是通过PCR扩增获得黄瓜单拷贝基因，然后对产物进行凝胶电泳回收纯化，以纯化产物为模板进行第二次PCR扩增，然后将第二次PCR产物标备探针。分别取黄瓜根尖和盛花期植株上的花蕾进行酶解，涂片法制片，挑选分散度高的片子，并进一步进行胃蛋白酶处理后，备用。最后将标好的探针杂交到处理好的载玻片上，在荧光显微镜下观察信号。本发明采用PCR扩增后切胶回收，之后再进行二次PCR扩增的方法，不仅可以去除基因组DNA的干扰，而且解决了切胶回收率低的问题；另外涂片法结合胃蛋白酶处理制作背景清晰且分散度高的片子可以提高信号的分辨率；通过此方法，可在染色体上直接检测到的最短长度为2kb的单拷贝基因，为黄瓜的细胞遗传学研究提供了可靠的保证。
黄瓜拷贝基因染色体物理定位方法

[发明专利]黄瓜抗蔓枯病渐渗系HH1‑8‑1‑2的培育方法及抗性基因位点分子标记-CN201610747510.4在审
发明人： 陈劲枫;张旭;徐建;刘佳;娄群峰;娄丽娜;李季 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2016-08-25 - 公布日： 2016-12-07 - 主分类号： A01H1/02 文献下载
摘要：本发明属于生物技术育种领域，涉及黄瓜抗蔓枯病渐渗系材料的培育方法。通过该材料获得黄瓜抗蔓枯病分子标记，专用于黄瓜抗蔓枯病分子辅助育种。本发明通过野生种与栽培种的种间杂交，染色体加倍后获得异源四倍体新种，经回交、自交，获得种间渐渗系。通过接种鉴定发现渐渗系HH1‑8‑1‑2的病情指数为24.6，表现为抗病。抗蔓枯病基因QTL位点与标记SSR17406紧密连锁。本发明成功选育了黄瓜抗蔓枯病渐渗系材料，该材料农艺性状优良，可作为育种材料。通过本发明提供的黄瓜抗蔓枯病基因QTL位点的分子标记检测HH1‑8‑1‑2的衍生品种(系)中是否含有该基因位点，可预测其抗性，提高选择效率，加速选育进程。
黄瓜抗蔓枯病渐渗系 hh1 培育方法抗性基因分子标记

[发明专利]黄瓜线粒体基因组SSR标记开发及其在种子纯度鉴定中的应用-CN201410727972.0在审
发明人： 陈劲枫;李海梅;沈佳;娄群峰;李季;钱春桃 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2014-12-01 - 公布日： 2016-08-24 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明基于黄瓜线粒体父系遗传的特性，使用线粒体基因组SSR标记技术鉴定黄瓜杂交种纯度的一种方法，涉及黄瓜线粒体基因组SSR标记开发，用开发的黄瓜线粒体标记分别对不同生态型的黄瓜品种进行多态性筛选，以及利用多态性标记对黄瓜F₁种子进行纯度检测，属于生物技术育种领域。本发明首次应用黄瓜线粒体基因组序列开发SSR标记来检测黄瓜杂种一代种子纯度，以期区分母本黄瓜植株上其他花粉来源的假杂交种和自交种，相对于核基因组SSR标记技术对品种鉴定方面的研究，其主要利用黄瓜线粒体父系遗传特性而多了一种新的检测方法，同时为追踪杂交过程中父系/母系线粒体基因组做技术准备。该方法也可以应用于其他父系植物材料杂种一代种子的检测。
黄瓜线粒体基因组 ssr 标记开发及其种子纯度鉴定中的应用

[发明专利]一个与黄瓜单性结实主效QTL紧密连锁的分子标记Indel-T-47-CN201510235861.2在审
发明人： 陈劲枫;武喆;李季;钱春桃;娄群峰;张璐;张婷;李蕾;张停林 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2015-05-06 - 公布日： 2015-07-22 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明公开了与单性结实主效QTL Parth2.1连锁的分子标记方法，属于生物技术领域。首先公开了与QTL Parth2.1紧密连锁的分子标记Indel-T-47，同时公开了该标记的引物Indel-T-47F/Indel-T-47R。在含有Parth2.1的分离群体中，该标记与单性结实性显著相关。在含有Parth2.1的全雌自交系材料中，标记引物Indel-T-47F/Indel-T-47R在强单性结实株系中均能扩增出155bp产物，是Parth2.1的峰值标记，与Parth2.1紧密连锁。本发明公开的与Parth2.1紧密连锁分子标记，可用于全雌黄瓜单性结实分子标记辅助育种。
一个黄瓜单性结实 qtl 紧密连锁分子标记 indel 47

[发明专利]黄瓜-酸黄瓜渐渗系抗蔓枯病IL14的筛选方法-CN201510184137.1在审
发明人： 陈劲枫;马华;娄群峰;李季;钱春桃 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2015-04-15 - 公布日： 2015-07-01 - 主分类号： A01H1/04 文献下载
摘要：本发明涉及抗蔓枯病黄瓜-酸黄瓜渐渗系IL14的筛选方法，通过不同浓度的批量处理，筛选出抗性表现良好的植株，属于生物技术育种领域。以野生种酸黄瓜为母本，栽培黄瓜‘北京截头’为父本杂交获得杂种F1，杂种F1通过胚胎拯救结合体细胞无性系变异染色体加倍技术，获得可育的种间异源四倍体新种，命名为Cucumis?hytivus，以异源四倍体新种Cucumis?hytivus为母本，与栽培品种‘北京截头’通过系统回交和自交选育，获得86份携带有野生种染色体片段的黄瓜种间渐渗系材料，分别编号为IL1-IL86。采用温室苗期人工接种鉴定技术筛选86份渐渗系群体，经春、秋两季接种处理得到稳定的中抗以上株系，再通过加大菌液浓度进行接种处理，筛选出抗蔓枯病株系IL14。
黄瓜渐渗系抗蔓枯病 il14 筛选方法

[发明专利]甜瓜抗蔓枯病聚合基因材料用于哈密瓜育种的方法-CN201310559623.8在审
发明人： 陈劲枫;徐兵划;钱春桃;娄群峰;毕研飞 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2013-11-13 - 公布日： 2015-05-20 - 主分类号： A01H1/02 文献下载
摘要：本发明甜瓜抗蔓枯病聚合基因材料用于哈密瓜育种的方法，属于生物技术育种领域，专用于甜瓜的抗蔓枯病聚合育种。将商品性优异但高感蔓枯病的哈密瓜自交系‘白皮脆’与甜瓜的抗蔓枯病聚合基因材料进行杂交，再以‘白皮脆’为回交亲本进行回交2次，其中BC1、BC2都经苗期接种鉴定和分子标记进行辅助筛选，筛选出聚合2份抗性基因且高抗的单株，并对BC2果实品质进行测定，获得了高抗蔓枯病且商品性良好的哈密瓜品系。本发明对甜瓜乃至整个蔬菜作物的聚合育种实践和理论研究具有重要的借鉴意义，极大地推动了甜瓜的品种改良。
甜瓜抗蔓枯病聚合基因材料用于哈密瓜育种方法

[发明专利]甜瓜抗蔓枯病聚合基因材料及其选育方法-CN201310559624.2无效
发明人： 陈劲枫;徐兵划;钱春桃;娄群峰;毕研飞 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2013-11-13 - 公布日： 2015-05-20 - 主分类号： A01H1/02 文献下载
摘要：本发明涉及一份甜瓜蔓枯病聚合抗源新种质及其选育的方法，属于植物生物技术育种领域。该聚合基因材料聚合了抗源PI420145和PI482398(Gsb-4)的抗蔓枯病基因，其抗性高于单一抗源，且农艺性状良好。选育方法是PI420145与PI482398杂交，所得F₁连续自交三代，其中，每一代都采用表型鉴定和分子标记辅助选择相结合的方法进行筛选，选出同时聚合了两亲本抗性基因且抗性高于亲本的单株自交。并将与抗蔓枯病材料PI420145的抗性基因连锁的AFLP标记EcoRI-TG/MseI-CTC₂₀₀转化为SCAR标记SGSB1800，能够迅速、简便的用于分子标记辅助选择。本发明获得的甜瓜抗蔓枯病聚合基因材料抗性高于单一抗源，且其鉴定方便，大大提高了甜瓜抗蔓枯病新品种的选择效率，提供了新抗源，也为进一步获得新的抗性品系奠定了基础。
甜瓜抗蔓枯病聚合基因材料及其选育方法

[发明专利]黄瓜6号染色体探针的制备方法及应用-CN201510040811.9在审
发明人：娄群峰;张振涛;张云霞;李子昂;陈劲枫 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2015-01-23 - 公布日： 2015-05-06 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了黄瓜6号染色体探针制备的方法和应用。它是基于黄瓜基因组序列，通过RepeatMasker软件和黄瓜基因组数据库BLAST分析选取不含重复序列的DNA序列，利用Primer Premier 5.0软件进行引物设计。通过PCR扩增获得覆盖单染色体的PCR产物，将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳纯化，利用核酸浓度测量仪测定浓度后，将每对引物等量的产物进行混池，并用缺刻平移法标记探针，并利用荧光原位杂交技术杂交到染色体制片上，完成单染色体探针的制备和检测应用。通过应用此方法，可以快速获得黄瓜单染色体或者任何染色体区段的探针，可对单染色体或任何染色体的形态结构进行精确的分析研究。
黄瓜染色体探针制备方法应用