本发明公开了一种华支睾吸虫蛋白Cs144的制备和应用,涉及生物检测技术领域,华支睾吸虫基因Cs144的编码区核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,华支睾吸虫蛋白Cs144的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示;包含华支睾吸虫Cs144基因的编码区核苷酸序列的重组质粒,以及该重组质粒的制备方法;华支睾吸虫蛋白Cs144在制备华支睾吸虫感染诊断抗原的应用,在制备华支睾吸虫感染ELISA检测试剂盒中的应用。本发明提供一种重组表达的华支睾吸虫蛋白Cs144,作为抗原应用于诊断肝吸虫病的ELISA检测中,解决ELISA检测中天然抗原成本高,难以工业化生产的问题。