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[发明专利]一种Ⅱ型伪狂犬病毒减毒株及其制备方法和应用-CN201710774869.5有效
发明人：周继勇;邢刚;金玉兰;顾金燕;颜焰;尹笛;廖敏;周赟;郑肖娟 -专利权人：浙江大学
申请日： 2017-08-31 - 公布日： 2020-05-12 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明公开了一种Ⅱ型伪狂犬病毒减毒株及其制备方法和应用。所述伪狂犬病毒减毒株，为gE‑/TK‑双缺毒株，命名为猪伪狂犬病病毒双缺株，株号PRV‑HD/c，保藏号为CGMCC No.14325。本发明伪狂犬病毒减毒株由新分离的猪伪狂犬病毒毒株经过gE和TK双基因缺失处理获得，致病力减弱，免疫原性强，用该伪狂犬病毒减毒株制备的灭活疫苗或减毒活疫苗可对猪只和小鼠等猪伪狂犬病毒易感动物提供有效免疫。
一种狂犬病毒减毒株及其制备方法应用

[发明专利]一种用于制备检测禽腺病毒4型试剂盒的引物对及其应用-CN201610338455.3有效
发明人：廖敏;莫开昆;周继勇;郑肖娟 -专利权人：浙江大学
申请日： 2016-05-19 - 公布日： 2019-04-02 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于制备检测禽腺病毒4型试剂盒的引物对及其应用，该引物对包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还公开了一种包含所述引物对的试剂盒以及检测禽腺病毒4型的方法。所述引物对能特异地扩增出样品中的禽腺病毒4型的Hexon基因片段，检测灵敏度高，最低检测限达7.2×10^‑4ng/μL，结果准确，可将其应用到对禽腺病毒4型的检测和鉴定当中；引物对对禽腺病毒4型的不同毒株的检测具有通用性；本发明建立的一种快速、特异、准确的禽腺病毒4型的检测方法，为今后对该病的流行检测和防控提供检测工具。
一种用于制备检测病毒试剂盒引物及其应用

[发明专利]一种Ⅱ型伪狂犬病毒毒株及其应用-CN201710776002.3在审
发明人：周继勇;邢刚;顾金燕;金玉兰;尹笛;廖敏;颜焰;范春梅;周赟;郑肖娟 -专利权人：浙江大学
申请日： 2017-08-31 - 公布日： 2018-02-02 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种Ⅱ型伪狂犬病毒毒株及其应用。所述伪狂犬病毒毒株，命名为猪伪狂犬病病毒PRV‑DX，保藏号为CGMCC No.14326。本发明猪伪狂犬病毒毒株PRV‑DX从经免疫过疫苗的猪场里出现的伪狂犬病病猪身上分离纯化到的一株新的猪伪狂犬病毒，该毒株属于II型伪狂犬病毒，对猪的致病力要远远强于经典的PRV标准强毒株SC株，该病毒在Vero细胞传代后，毒价逐渐升高至第8代后趋于稳定，最高可达109 TCID50/mL。本发明猪伪狂犬病毒毒株PRV‑DX对我国猪伪狂犬病毒流行病学调查及新流行强毒株的防控具有重要的意义。
一种狂犬病毒及其应用

[发明专利]表达传染性法氏囊病毒VP1基因编码蛋白永生化细胞制备方法-CN200710084566.7无效
发明人：周继勇;叶菊秀;陈庆新;郑肖娟 -专利权人：浙江大学
申请日： 2005-03-08 - 公布日： 2008-03-19 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明公开了一种表达传染性法氏囊病毒VP1基因编码蛋白永生化细胞制备方法。反转录获得传染性法氏囊病毒基因组cDNA，PCR扩增VP1基因片段与哺乳动物细胞真核表达pCI－neo构建成重组表达质粒。在Lipofectamine2000介导下转染Vero细胞，在G418的抗性下，通过极限稀释法克隆单细胞，经PCR、RT－PCR、Southern blot、Northern blot、IFA/IPMA检测，获得含目的基因的克隆化细胞系，经反复传代培养后不丢失。这些细胞系可作为研究传染性法氏囊病毒基因编码蛋白对宿主细胞基因表达调控的载体，以及将表达传染性法氏囊病毒VP1基因编码蛋白应用于传染性法氏囊病的免疫接种。本发明应用基因工程技术、细胞重组技术制备表达传染性法氏囊病毒VP1基因编码蛋白的永生细胞，具有重复性强、稳定性好，再生能力强等特点。
表达传染性法氏囊病毒 vp1 基因编码蛋白永生细胞制备方法

[发明专利]表达传染性法氏囊病毒VP3基因编码蛋白永生化细胞制备方法-CN200710084567.1无效
发明人：周继勇;叶菊秀;陈庆新;郑肖娟 -专利权人：浙江大学
申请日： 2005-03-08 - 公布日： 2008-03-19 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明公开了一种表达传染性法氏囊病毒VP3基因编码蛋白永生化细胞制备方法。反转录获得传染性法氏囊病毒基因组cDNA，PCR扩增VP3基因片段与哺乳动物细胞真核表达pCI－neo构建成重组表达质粒。在Lipofectamine 2000介导下转染Vero细胞，在G418的抗性下，通过极限稀释法克隆单细胞，经PCR、RT－PCR、Southern blot、Northern blot、IFA/IPMA检测，获得含目的基因的克隆化细胞系，经反复传代培养后不丢失。这些细胞系可作为研究传染性法氏囊病毒基因编码蛋白对宿主细胞基因表达调控的载体，以及将表达传染性法氏囊病毒VP3基因编码蛋白应用于传染性法氏囊病的免疫接种。本发明应用基因工程技术、细胞重组技术制备表达传染性法氏囊病毒VP3基因编码蛋白的永生细胞，具有重复性强、稳定性好，再生能力强等特点。
表达传染性法氏囊病毒 vp3 基因编码蛋白永生细胞制备方法

[发明专利]表达传染性法氏囊病毒VP5基因编码蛋白永生化细胞制备方法-CN200710084565.2无效
发明人：周继勇;叶菊秀;陈庆新;郑肖娟 -专利权人：浙江大学
申请日： 2005-03-08 - 公布日： 2008-03-12 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明公开了一种表达传染性法氏囊病毒VP5基因编码蛋白永生化细胞制备方法。反转录获得传染性法氏囊病毒基因组cDNA，PCR扩增VP5基因片段与哺乳动物细胞真核表达pCI－neo构建成重组表达质粒。在Lipofectamine 2000介导下转染Vero细胞，在G418的抗性下，通过极限稀释法克隆单细胞，经PCR、RT－PCR、Southern blot、Northern blot、IFA/IPMA检测，获得含目的基因的克隆化细胞系，经反复传代培养后不丢失。这些细胞系可作为研究传染性法氏囊病毒基因编码蛋白对宿主细胞基因表达调控的载体，以及将表达传染性法氏囊病毒VP5基因编码蛋白应用于传染性法氏囊病的免疫接种。本发明应用基因工程技术、细胞重组技术制备表达传染性法氏囊病毒VP5基因编码蛋白的永生细胞，具有重复性强、稳定性好，再生能力强等特点。
表达传染性法氏囊病毒 vp5 基因编码蛋白永生细胞制备方法

[发明专利]表达传染性法氏囊病毒VP2基因编码蛋白永生化细胞制备方法-CN200710084568.6无效
发明人：周继勇;叶菊秀;陈庆新;郑肖娟 -专利权人：浙江大学
申请日： 2005-03-08 - 公布日： 2008-03-12 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明公开了一种表达传染性法氏囊病毒VP2基因编码蛋白永生化细胞制备方法。反转录获得传染性法氏囊病毒基因组cDNA，PCR扩增VP2基因片段与哺乳动物细胞真核表达pCI－neo构建成重组表达质粒。在Lipofectamine 2000介导下转染Vero细胞，在G418的抗性下，通过极限稀释法克隆单细胞，经PCR、RT－PCR、Southern blot、Northern blot、IFA/IPMA检测，获得含目的基因的克隆化细胞系，经反复传代培养后不丢失。这些细胞系可作为研究传染性法氏囊病毒基因编码蛋白对宿主细胞基因表达调控的载体，以及将表达传染性法氏囊病毒VP2基因编码蛋白应用于传染性法氏囊病的免疫接种。本发明应用基因工程技术、细胞重组技术制备表达传染性法氏囊病毒VP2基因编码蛋白的永生细胞，具有重复性强、稳定性好，再生能力强等特点。
表达传染性法氏囊病毒 vp2 基因编码蛋白永生细胞制备方法

[发明专利]表达传染性法氏囊病毒基因编码蛋白永生化细胞制备方法-CN200510049306.7无效
发明人：周继勇;叶菊秀;陈庆新;郑肖娟 -专利权人：浙江大学
申请日： 2005-03-08 - 公布日： 2005-11-16 - 主分类号： C12N15/33 文献下载
摘要：本发明公开了一种表达传染性法氏囊病毒基因编码蛋白永生化细胞制备方法。反转录获得传染性法氏囊病毒基因组cDNA，PCR扩增不同编码蛋白的基因片段与哺乳动物细胞真核表达pCI－neo构建成重组表达质粒。在Lipofectamine2000介导下转染Vero细胞，在G418的抗性下，通过极限稀释法克隆单细胞，经PCR、RT－PCR、Southern blot、Northernblot、IFA/IPMA检测，获得含目的基因的克隆化细胞系，经反复传代培养后不丢失。这些细胞系可作为研究传染性法氏囊病毒基因编码蛋白对宿主细胞基因表达调控的载体，以及将表达传染性法氏囊病毒基因编码蛋白应用于传染性法氏囊病的免疫接种。本发明应用基因工程技术、细胞重组技术制备表达传染性法氏囊病毒基因编码蛋白的永生细胞，具有重复性强、稳定性好，再生能力强等特点。
表达传染性法氏囊病毒基因编码蛋白永生细胞制备方法

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