本发明公开了一种监测pre‑mRNA剪接效率的双报告基因探针及制备方法,所述的探针包括载体pcDNA3.1、基因片段A、B、C,所述的基因片段A、B、C按照A‑B‑C顺序与线性化的pcDNA3.1载体重组,所述的片段A为Fluc,所述的片段B由exon 1、Intron、exon 2组成,所述的片段C为Rluc。所述的探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。通过对本发明的报告基因分子影像探两种荧光素酶产生的信号比值Fluc/Rluc进行分析,实时、无创地分析在体pre‑mRNA的剪接效率,为调控pre‑mRNA剪接的药物研究提供了有效的筛选工具。