本发明属于分子生物学领域,特别是指基于核酸外切酶Ⅲ的功能化发夹探针、组合物及提高检测Pax‑5a基因灵敏度的方法。所述功能化发夹探针序列如SEQ ID No.1所示,该功能化发夹探针包括G‑四链体片段和3’凹陷末端区域。包含功能化发夹探针的检测组合物,还包括引物、DNA聚合酶、核酸外切酶Ⅲ和氯化血红素溶液。本发明的发夹探针引入了G‑四链体序列;同时形成了3’凹陷末端,便于核酸外切酶Ⅲ的剪切,降低了背景信号的干扰;并且设计的发夹探针是能够识别目的基因的多功能实体;通过引物和DNA聚合酶的作用,实现了目标基因的循环利用,放大了检测信号,降低了检测下限,使得最低检测限达60.1 fM。