本发明提供了用于检测盐酸克伦特罗的核酸适配体,其是下列核苷酸序列中的一种:具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列;在所述SEQ ID NO.1的核苷酸序列上的两端均截短相同长度的核酸适配体,且所述截短长度为1‑11bp;其中两端均截短1‑11bp的核酸适配体具有一一对应的SEQ ID NO.12‑SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。本发明还提供了所述核酸适配体的筛选方法及其应用。该核酸适配体特异性强,与盐酸克伦特罗类似物不存在交叉反应;亲和力高,亲和力常数为(42.17±8.97)nM;灵敏度高:能检测到盐酸克伦特罗的最低检测限为1.2ng/mL。