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[发明专利]一种降低植物小分子信号肽假阳性率的方法-CN201911372695.5有效
发明人：肖浪涛;苏益;罗为桂 -专利权人：湖南农业大学
申请日： 2019-12-27 - 公布日： 2023-09-08 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种降低植物小分子信号肽假阳性率的方法，包括以下步骤：S1、利用植物原生质体制备总蛋白，再将总蛋白超滤后，收集滤液，将滤液样品先经过还原再进行烷基化处理后，得到待测样品；S2、利用液质联用仪对待测样品进行测定，并对测定后的数据进行分析。该方法从没有细胞壁保护的原生质体中提取蛋白质更容易且原生质体更利于保持蛋白与小肽的完整性，不仅操作简单，而且测定结果中假阳性率更低。
一种降低植物分子信号肽阳性方法

[发明专利]一种水稻Osspear2突变体植株的制备方法-CN202111068123.5有效
发明人：于宇;文浩明;陶晋源;罗为桂;莫蓓莘 -专利权人：深圳大学;深圳大学龙华生物产业创新研究院
申请日： 2021-09-13 - 公布日： 2023-06-27 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：本发明公开了一种水稻Osspear2突变体植株的制备方法，其包括步骤：筛选水稻基因OsSPEAR2的sgRNA靶点序列；根据所述sgRNA靶点序列设计上、下游引物；将所述上游引物和下游引物混合并进行退火处理，形成双链DNA；用限制性内切酶对质粒进行酶切得到线性质粒；用T4DNA连接酶连接所述线性质粒和双链DNA得到连接产物，所述连接产物经转化、筛选得到重组质粒；将所述重组质粒导入相应的浸染细菌中，得到含有重组质粒的浸染细菌，然后用含有重组质粒的浸染细菌侵染水稻愈伤组织；对所述水稻愈伤组织进行诱导获得再生苗，筛选得到转基因阳性植株。本发明获得了一种具有重要应用价值的水稻Osspear2突变体，且所述Osspear2突变体出现花粉败育的现象，对杂交水稻的生产具有重要应用价值。
一种水稻 osspear2 突变体植株制备方法

[发明专利]一种用于植物生长素分离纯化的层析柱及分离方法-CN201810015432.8有效
发明人：肖浪涛;苏益;蔺万煌;王若仲;罗为桂 -专利权人：湖南农业大学
申请日： 2018-01-08 - 公布日： 2021-07-06 - 主分类号： B01D15/38 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于植物生长素分离纯化的层析柱及分离方法，层析柱内的树脂中固定有IAA亲和蛋白，如IAA7蛋白、TIR1受体蛋白和TIR1‑IAA共受体蛋白等中的任意一种。本发明突破了传统方法难以从微量植物样品中有效分离和纯化IAA的困难，解决了传统方法操作复杂、有机抽提不环保和分离纯化效率低的问题，大大提高IAA的分离纯化效率，在植物鲜重为10～50mg情况下能从植物匀浆液中快速一步分离纯化到足量的IAA用于液相‑质谱联用仪检测。本发明中的分离纯化方法大大简化了IAA的分离纯化过程、操作简单并且成本低廉。
一种用于植物生长素分离纯化层析方法

[发明专利]一种高效的植物双元诱导基因表达重组质粒-CN201710174053.9有效
发明人：肖浪涛;苏益;黄志刚;蔺万煌;王若仲;罗为桂 -专利权人：湖南农业大学
申请日： 2017-03-22 - 公布日： 2020-02-14 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：一种高效的植物双元诱导基因表达重组质粒，由以下步骤实现：构建受生长素IAA诱导的DR5启动子，以此启动子启动酵母转录激活蛋白Gal4的BD结构域表达；构建受低温诱导的启动子，以此启动子启动酵母转录激活蛋白Gal4的AD结构域表达；构建受Gal4激活的启动子，以此启动报告基因GFP的表达；将上述三个表达段导入同一个植物表达载体pBI121，即可。本发明需要两个诱导条件同时存在时才能诱导报告基因表达，减少干扰；同时，本发明利用Gal4/UAS系统基本原理，实现了诱导信号的两级放大，可以提高诱导信号的检测灵敏度；另外，本发明还具有很大的灵活性和延伸性，多种响应化学信号、物理信号的DNA元件都可以用于构建双元诱导表达系统，可以广泛应用于现代遗传学和分子生物学的研究。
一种高效植物诱导基因表达重组质粒

[发明专利]一种稗草原生质体的提取方法-CN201610647287.6在审
发明人：彭琼;柏连阳;罗为桂;李祖任;邬腊梅;王立峰;杨浩娜 -专利权人：湖南省农业生物技术研究中心
申请日： 2016-08-09 - 公布日： 2016-12-21 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种稗草原生质体的提取方法，该提取方法包括如下步骤：选取饱满、成熟度一致的稗草种子，然后直播于培养基质中；待幼苗长至3‑5叶期，切取主茎及主茎上幼嫩的叶片；将获得的茎段及叶片擦干，横切茎段、沿叶片主脉纵切叶片，切成0.5‑1.5mm的细丝，快速、轻柔地将细丝转移至盛有酶解液的10mL离心管中，并使试验细丝完全浸没于酶解液中，在25℃黑暗条件下振荡酶解3‑6h；经酶解后，离心，去掉上清液，收集原生质体；加入洗液重悬，离心，再弃上清液，得到的溶液即为纯的原生质体。本发明方法的分离材料易于得到，提取操作简单，分离得到的原生质体数量多，得率高，完整性好，为原生质体转染及原生质体融合奠定了基础。
一种稗草原生质体提取方法