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[发明专利]一种在真菌中表达红色荧光的质粒载体及其构建方法和应用-CN202310381407.2在审
发明人： 理永霞;张伟;王瑞炯;温晓健;李东振;王璇;刘振凯;冯宇倩;张星耀 -专利权人：中国林业科学研究院森林生态环境与自然保护研究所（国家林业和草原局世界自然遗产保护研究中心）
申请日： 2023-04-11 - 公布日： 2023-08-08 - 主分类号： C12N15/80 文献下载
摘要：本发明公开了一种在真菌中表达红色荧光的质粒载体，其特征在于，所述质粒载体包括细菌复制子片段、抗生素抗性片段、表达红色荧光片段。本发明还公开了所述质粒载体的构建方法及其应用，以及一种使用所述质粒载体构建表达红色荧光的真菌Esteya vermicola的方法及其应用。利用本发明公开的表达红色荧光的真菌Esteya vermicola侵染松材线虫，可在荧光条件下观察到真菌寄生松材线虫的全过程，对于松材线虫病的生物防治具有重要意义。
一种真菌表达红色荧光质粒载体及其构建方法应用

[发明专利]一种用于松材线虫防治的pH响应型自荧光纳米农药载体及制备方法、纳米农药和应用-CN202210890306.3有效
发明人：孔祥波;干威;理永霞;张峰碧;郭晓滨;张星耀;方加兴;刘福;张苏芳 -专利权人：中国林业科学研究院森林生态环境与自然保护研究所
申请日： 2022-07-27 - 公布日： 2023-07-07 - 主分类号： A01N25/08 文献下载
摘要：本发明提供了一种用于松材线虫防治的pH响应型自荧光纳米农药载体及制备方法、纳米农药和应用，属于松材线虫病防治技术领域。所述纳米农药载体由G3.0PAMAM和介孔二氧化硅组成。采用本发明提供的纳米农药载体制备的纳米农药具有pH响应和自荧光双重性质，有效解决了松材线虫病防治过程中人工钻孔成本高、操作费时、孔洞不利于树木正常生长以及传统农药制剂功能单一、利用效率低、对松材线虫防治效果差等问题，实现用于松材线虫病防治药剂的pH响应释放和可视化追踪，达到农药减施增效，降低农药残留和环境污染的目的。
一种用于松材线虫防治 ph 响应荧光纳米农药载体制备方法应用

[发明专利]一种防治松材线虫病的苏云金芽孢杆菌工程菌制备方法与应用-CN202210614856.2有效
发明人： 理永霞;李东振;王璇;刘振凯;张星耀 -专利权人：中国林业科学研究院森林生态环境与自然保护研究所
申请日： 2022-06-01 - 公布日： 2023-04-21 - 主分类号： C12N15/75 文献下载
摘要：本发明涉及一种苏云金芽孢杆菌高效表达载体、工程菌及其制备方法与应用。所构建苏云金芽孢杆菌表达载体在宿主细胞中高效表达外源蛋白。所构建工程菌株兼具杀线虫能力和马尾松树体内定殖能力。
一种防治松材线虫苏云金芽孢杆菌工程制备方法应用

[发明专利]一种扩散型3龄松材线虫的鉴定方法-CN202110975360.3有效
发明人：崔嵘;理永霞;潘龙;白建伟;李杰 -专利权人：中国林业科学研究院林业新技术研究所
申请日： 2021-08-24 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： A01K67/033 文献下载
摘要：本发明涉及线虫鉴定技术领域，具体涉及一种扩散型3龄松材线虫的鉴定方法。本发明提供的扩散型3龄松材线虫的鉴定方法包括采用形态学和分子生物学鉴定扩散型3龄松材线虫。本发明针对扩散型3龄松材线虫提供合理适宜的分类鉴定标准，本发明可以实现将扩散型3龄松材线虫虫态与松材线虫其它时期形态进行形态学分类，细化了松材线虫不同时期的形态学的分类。
一种扩散松材线虫鉴定方法

[发明专利]用于制备伊氏杀线真菌孢子粉的培养基及伊氏杀线真菌孢子粉的制备方法-CN202211567108.X在审
发明人： 理永霞;温晓健;王璇;刘振凯;李东振;张伟;冯宇倩;张星耀 -专利权人：中国林业科学研究院森林生态环境与自然保护研究所
申请日： 2022-12-07 - 公布日： 2023-03-28 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于制备伊氏杀线真菌孢子粉的培养基及伊氏杀线真菌孢子粉的制备方法。本发明用于制备伊氏杀线真菌孢子粉的培养基，按重量百分比包括如下组分：葡萄糖2‑3％，酵母浸粉0.5‑1％，蛋白胨0.1‑0.5％，无机盐0.4‑0.8％，余量为水。本发明提供的培养基及制备方法可获得高浓度的孢子悬浮液和高活性的孢子粉，同时获得的孢子粉便于储存和运输，且可以进一步加工成不同类型的剂型用于松材线虫病的防治。
用于制备伊氏杀线真菌孢子培养基方法

[发明专利]一种粘质沙雷氏菌的制备方法和应用-CN202210621355.7在审
发明人： 理永霞;李东振;孙宁宁;王璇;温晓健;张星耀 -专利权人：中国林业科学研究院森林生态环境与自然保护研究所
申请日： 2022-06-01 - 公布日： 2022-12-09 - 主分类号： C12N1/02 文献下载
摘要：本发明适用于微生物技术领域，提供了一种粘质沙雷氏菌的制备方法，方法包括：采集马尾松枝条和树干样品；将样品剪成样品块，并将样品块消毒；用无菌枝剪将样品块接触处理液表面去除，再将样品块剪成组织块；将组织块置于离心管中，并在摇床中震荡；取上清液涂布于牛肉膏蛋白胨固体培养基，置于培养箱黑暗培养；挑取红色单斑放入牛肉膏蛋白胨液体培养基中，置于摇床下培养，获得分离得到的菌株；采集自浙江省马尾松木质部，具有显著的杀线虫能力，且对松树内微生态环境具有较好的适应性，对松材线虫病的发生具有抑制作用；该菌株不会对环境产生不良影响，且菌株活性稳定，生产成本低，生产过程简单，适用于松材线虫病防控的推广应用。
一种粘质沙雷氏菌制备方法应用

[发明专利]对植物内生微生物组的宏基因组进行原位改造的方法-CN202210701513.X在审
发明人： 理永霞;李东振;刘振凯;张星耀 -专利权人：中国林业科学研究院森林生态环境与自然保护研究所
申请日： 2022-06-21 - 公布日： 2022-08-09 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明适用于微生物技术领域，提供了对植物内生微生物组的宏基因组进行原位改造的方法，通过构建植物内生微生物原位宏基因组改造的工程质粒；构建植物内生微生物原位宏基因组改造的供体菌；在植物体外对内生微生物进行宏基因组改造及受体菌分离培养；在植物体内对内生微生物组进行原位宏基因组改造，为操纵植物微生物宏基因组研究提供了有效路径。
植物微生物宏基进行原位改造方法

[发明专利]一种用于防控松材线虫病的预防性制剂-CN202210068015.6在审
发明人： 理永霞;刘振凯;温晓健;王璇;张雷;张星耀 -专利权人：中国林业科学研究院森林生态环境与自然保护研究所
申请日： 2022-01-20 - 公布日： 2022-05-10 - 主分类号： A01N43/40 文献下载
摘要：本发明适用于农药复配技术领域，提供了一种用于防控松材线虫病的预防性制剂，包括具有增效作用的杀虫组合物，该杀虫组合物组成成分包括活性成分氟吡菌酰胺和活性成分阿维菌素两种，且两者质量比为20：1‑1：10，优选比为20:1‑10:1，本发明杀虫组合物可制成可湿性粉剂、水分散粒剂、悬浮剂、悬乳剂、水乳剂、微乳剂。本发明的两组活性成分复配后具有明显的增效作用，由于两者的杀虫机理不同，作用方式不同，两种药剂的复配组合物可同时作用于靶标不同位点，起到优势互补的作用，提高对线虫的防治效果，延缓抗药性的产生，对寄主安全、环境安全，有效解决了传统农药制剂药效低、无法杀死树干内线虫、线虫易产生抗药性等问题，实现松材线虫病的高效防控。
一种用于松材线虫预防性制剂

[发明专利]木酢液在促进Esteya vermicola芽生孢子萌发产生新月形孢子中的应用-CN202210068126.7在审
发明人： 理永霞;温晓健;王璇;刘振凯;张雷;张星耀 -专利权人：中国林业科学研究院森林生态环境与自然保护研究所
申请日： 2022-01-20 - 公布日： 2022-05-10 - 主分类号： C12N3/00 文献下载
摘要：本发明适用于微生物技术领域，提供了木酢液在促进Esteya vermicola芽生孢子萌发产生新月形孢子中的应用，在Esteya vermicola芽生孢子萌发阶段施用木酢液，可以显著提高该菌产新月形孢子的数量，具体的是，在灭菌后的水琼脂培养基中加入木酢液后倒板，待凝固后涂布Esteya vermicola的芽生孢子悬浮液，放入恒温培养箱中在25℃条件下培养5d，即可获得大量的新月形孢子。通过添加木酢液可使Esteya vermicola芽生孢子萌发产生更多的新月形孢子，便于开展新月形孢子杀死松材线虫的机制研究，提高科研人员的工作效率，而且木酢液本身具有诱导抗性功能，在野外与Esteya vermicola芽生孢子悬浮液一起施用的话对松材线虫病的防控有增效作用，未来具有很大的应用价值。
木酢液促进 esteya vermicola 孢子萌发产生新月形中的应用

[发明专利]一种用于润湿剂生产的加工装置-CN202210050934.0在审
发明人： 理永霞;张雷;王云堂;周梦豪;张星耀 -专利权人：安徽森科生物科技有限公司
申请日： 2022-01-17 - 公布日： 2022-05-06 - 主分类号： B01F29/10 文献下载
摘要：本发明适用于润湿剂加工技术领域，提供了一种用于润湿剂生产的加工装置，包括架体以及可在架体上进行全方位转动的高真空精馏釜，高真空精馏釜的底部设置有动力部和万象传动部，动力部通过万象传动部带动高真空精馏釜在架体上进行全方位转动并同时带动内部的搅拌轴进行转动搅拌；通过动力部带动万象传动部的转动，其中第一万象节叉的转动通过锥齿轮在锥齿环内的圆周运动，带动高真空精馏釜的底面在外环、中环以及高真空精馏釜之间十字形的转轴配合下作底部的圆周运行，实现对高真空精馏釜内部原料的摇匀作业，同时高真空精馏釜内部的搅拌轴也被第三万象节叉带动进行转动，进一步实现对其内部的原料进行搅拌作业，实现内部原料的充分混合。
一种用于润湿生产加工装置

[发明专利]一种促进长枝木霉产分生孢子的液体发酵方法-CN202210068022.6在审
发明人： 理永霞;温晓健;陆建卫;王璇;张雷;张星耀 -专利权人：中国林业科学研究院森林生态环境与自然保护研究所
申请日： 2022-01-20 - 公布日： 2022-05-06 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明适用于微生物发酵工程技术领域，提供了一种促进长枝木霉产分生孢子的液体发酵方法，一：根据培养基配方配制木霉的液体培养基；二：通过氢氧化钠溶液调整液体培养基的pH为7，然后高温高压下灭菌，即得到木霉的液体发酵培养基；三：将保存的长枝木霉菌株接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基上活化培养获得该长枝木霉菌株的菌饼；四：在装有培养基的三角瓶中接种长枝木霉菌株的菌饼；五：将接种好的培养基于25‑28℃，200rpm/min条件下振荡培养4‑6天，获得种子培养液；六：将种子培养液按1％的接种量接种到装有液体培养基的发酵罐中，在温度为28‑30℃、通气量为0.8‑1.0L/L的条件下发酵48h，产生的分生孢子可达1×109cfu/mL，培养基配方成本低廉，培养液中杂质较少，便于后续剂型加工。
一种促进长枝木霉产分生孢子液体发酵方法

[发明专利]松材线虫的特异性PCR检测引物、检测方法及检测试剂盒-CN201910828765.7有效
发明人： 理永霞;孟繁丽;刘振凯;王璇;冯宇倩;张伟;张星耀 -专利权人：中国林业科学研究院林业新技术研究所
申请日： 2019-09-03 - 公布日： 2022-04-22 - 主分类号： C12Q1/6888 文献下载
摘要：本发明公开了松材线虫的特异性PCR检测引物、检测方法及检测试剂盒。本发明以松材线虫的Bx‑tlp‑1基因为靶标设计了多对引物，经过筛选发现SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物对扩增松材线虫和拟松材线虫DNA，结果松材线虫有特异性片段，该片段大小为755bp，而拟松材线虫无特异性片段；本发明进一步利用该特异性引物对扩增野外采集的媒介天牛组织DNA，结果扩增出松材线虫的特异性片段。本发明所筛选出的PCR特异性引物对具有良好的特异性和灵敏度，能够准确的检测媒介天牛是否携带松材线虫，并在野外对媒介天牛实现快速检测。
松材线虫特异性 pcr 检测引物方法试剂盒

[发明专利]一种表面活性剂琥珀酸二辛脂磺酸钠的生产装置-CN202210021206.7在审
发明人： 理永霞;张雷;张潇予;汪华;张星耀 -专利权人：安徽森科生物科技有限公司
申请日： 2022-01-10 - 公布日： 2022-04-15 - 主分类号： B01J19/18 文献下载
摘要：本发明适用于生产设备技术领域，提供了一种表面活性剂琥珀酸二辛脂磺酸钠的生产装置，包括：反应罐，其具有罐体，以及通过连接法兰可拆卸连接于其顶部的罐盖，所述罐体与所述罐盖之间相互连通，所述罐盖的顶部一体成型有安装座，支撑架，其套接固定于所述罐体的外侧，且用以实现对所述反应罐的支撑固定，入料管，其竖立的贯穿所述安装座与所述罐盖的中心位置，且所述入料管位于所述罐体内的外壁上，沿其延伸方向的周壁上，依次间隔的开设有若干出料孔，将原料通过入料管导入到罐体内，在导入原料的过程中，电机控制第一传动轮带动传动皮带旋转，驱动第二传动轮带动入料管进行旋转，其内流通的原料会在离心力的驱使下，顺着出料孔向外溅射。
一种表面活性剂琥珀酸二辛脂磺酸钠生产装置

[发明专利]一种扩散型3龄松材线虫的低温保存方法-CN202110292993.4有效
发明人：潘龙;崔嵘;理永霞 -专利权人：中国林业科学研究院林业新技术研究所
申请日： 2021-03-18 - 公布日： 2022-04-12 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明涉及线虫保存技术领域，具体涉及一种扩散型3龄松材线虫的低温保存方法。本发明提供的扩散型3龄松材线虫的低温保存方法包括采用氯化钾溶液处理扩散型3龄松材线虫，再进行低温保存的步骤。本发明针对扩散型3龄松材线虫提供适宜的低温保存方法，该方法先对扩散型3龄松材线虫进行渗透脱水处理，再进行低温保存，显著提高了扩散型3龄松材线虫在低温保存过程中的存活率；经低温保存的扩散型3龄松材线虫只需经过复水处理即可复活，经过常规培养后即可转化为繁殖型松材线虫。该保存方法不需要使用冷冻保护剂，不依赖复杂的程序性降温方法，具有操作简单、成本低廉的优势，适于推广应用。
一种扩散松材线虫低温保存方法

[发明专利]检测松材线虫的LAMP引物、检测方法及LAMP检测试剂盒-CN202111217721.4在审
发明人：孟繁丽;刘振凯;理永霞;张星耀 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2021-10-19 - 公布日： 2022-02-08 - 主分类号： C12Q1/6888 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测松材线虫的LAMP引物、检测方法及LAMP检测试剂盒。本发明以Bx‑cpi基因作为松材线虫LAMP检测的靶标基因设计多对LAMP检测引物，通过大量的筛选试验最终筛选得到了特异性强、检测效率高的LAMP引物组。在此基础上，本发明提供了检测松材线虫的LAMP检测方法以及LAMP试剂盒。本发明提供的LAMP检测方法以及检测试剂盒具有操作简便、成本低、稳定性高、特异性强、检测效率高等优点，在松材线虫检测中具有应用前景。
检测松材线虫 lamp 引物方法试剂盒

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