本发明提供一种猪干扰素α17突变体重组蛋白的制备方法与应用,该突变体重组蛋白是将SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中第66位由亮氨酸(L)突变为苯丙氨酸(F),第102位由谷氨酸(E)突变为天冬氨酸(D),并在氨基酸序列C端连接氨基酸序列“QDRLRKKE”。重组蛋白的制备方法包括:将上述猪干扰素α17突变体两端引入酶切位点后合成;将合成的片段和pVB220质粒进行酶切后纯化并用T4连接酶连接;转化DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆,接种培养;将包涵重组表达质粒菌落进行温度诱导表达;培养结束后将菌液离心,收集菌体;将菌体进行超声破碎后,重悬浮包涵体,并进行分离纯化,即得。该重组蛋白应用于抗VSV或抗PRV药物或疫苗制备。