本发明公开了一种鸭短喙长舌综合征纳米PCR检测试剂盒及其检验方法。所述试剂盒包括蛋白酶K,裂解液,醋酸钠,饱和酚׃氯仿׃异戊醇,无水乙醇,无菌蒸馏水,其特征在于所述试剂盒还包括2×NanoPCR Mix、上游引物和下游引物,其中,上游引物的序列为SEQ ID No.1所示,下游引物的序列为SEQ ID No.2所示。该试剂盒可用于检测鸭短喙长舌综合征。本发明还提供了一种采用前述试剂盒进行鸭短喙长舌综合征检测的方法,能够快速、特异的检测鸭短喙长舌综合征,大大提高了鸭短喙长舌综合征的检测效率及鸭短喙长舌综合征病毒的特异性扩增产量。