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[发明专利]一种长春花CrWRKY7蛋白多肽的制备及应用-CN202310961325.5在审
发明人： 潘琪芳;曾思瑀;潘元炳;唐克轩 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2023-08-01 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明公开了一种长春花CrWRKY7蛋白多肽的制备及应用，涉及生物技术领域，其制备方法为将CrWRKY7蛋白编码序列通过可操作地方法连于表达调控序列，从而形成长春花CrWRKY7表达载体；长春花CrWRKY7蛋白多肽在调控TIAs合成的应用；过表达CrWRY7蛋白多肽提高长春花中TIAs含量的检测方法，通过双荧光素酶实验检测其直接激活关键酶基因的启动子、通过酵母单杂交实验检测其与启动子结合、检测过表达CrWRY7蛋白多肽是否提高长春花中TIAs含量。本发明制备的长春花CrWRKY7蛋白多肽显著提高脱水长春碱在长春花中合成积累，为通过转录因子提高长春碱等重要生物碱的产量提供了调控方式。
一种长春花 crwrky7 蛋白多肽制备应用

[发明专利]一种核苷酸序列及其在增强植物抗有害生物能力中的应用-CN201811316873.8有效
发明人：唐克轩;赵静雅;付雪晴;刘航;潘琪芳;陈甜甜;钱虹妹;孙小芬 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2018-11-07 - 公布日： 2023-09-19 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了一种核苷酸序列及其在增强植物抗有害生物能力中的应用。通过V‑ATPase subunit E基因片段和COO2基因片段构建双基因RNAi载体，转入植物，在植物中表达产生V‑ATPase subunit E和COO2双基因的dsRNA，从而达到抑制蚜虫生长的目的。本发明利用基因工程手段获得的抗虫转基因植物具有只对目标害虫有效，而对非危害生物没有影响的优点，植物表达产生的抗虫物质存在于植物体内，不会对环境造成污染，且成本低，利于推广。
一种核苷酸序列及其增强植物有害生物能力中的应用

[发明专利]从甜叶菊中提取甜菊苷和莱鲍迪苷A的天然低共熔溶剂-CN202010567274.4有效
发明人： 潘琪芳;缪晴;刘品;唐克轩 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2020-06-19 - 公布日： 2023-07-28 - 主分类号： C07H15/256 文献下载
摘要：本发明公开了一种从甜叶菊中提取甜菊苷和莱鲍迪苷A的天然低共熔溶剂及其制备方法和提取方法。本发明第一方面提供了一种从甜叶菊中提取甜菊苷和莱鲍迪苷A的天然低共熔溶剂，所述溶剂由1,2‑丙二醇、甘油和水组成。本发明提供的天然低共熔溶剂与传统水提或醇提法相比，可有效提高甜叶菊中甜菊苷和莱鲍迪苷A的提取率，其中，甜菊苷的提取浓度比水提法高16.4％，比醇提法(甲醇)高25.7％；莱鲍迪苷A的提取浓度比水提法高12.6％，比醇提法(甲醇)高15.6％，对提高甜菊苷和莱鲍迪苷A的工业生产具有重要的意义。
甜叶菊中提取甜菊苷莱鲍迪苷天然低共熔溶剂

[发明专利]一种牡蒿叶肉原生质体的分离和转化方法-CN202011334948.2有效
发明人： 潘琪芳;邓伯富;彭柏文;唐克轩 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2020-11-25 - 公布日： 2022-10-04 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种牡蒿叶肉原生质体分离及瞬时转化的方法，包括以下步骤：1)选取幼嫩牡蒿叶片去除下表皮，将除去下表皮的叶片置于甘露醇溶液中浸泡；2)将于甘露醇溶液浸泡后的叶片放入牡蒿酶解液，在黑暗中抽真空，避光酶解，得到含叶肉原生质体的酶解混合液；3)洗涤酶解混合液、过滤离心得到原生质体沉淀，重悬后获得原生质体悬浮液；4)利用瞬时转化方法将携带绿色荧光蛋白GFP标签的质粒转入上述原生质体中，经过培养，使其在牡蒿原生质体中表达。本发明得到的原生质体产量为1.93×106个/g FW，活力为87.5％，获得的原生质体产量高，状态良好。该技术为开展蛋白间相互作用、亚细胞定位等研究奠定实验基础。
一种叶肉原生质体分离转化方法

[发明专利]一种天然低共熔溶剂及其制备方法和应用于提取叶黄素-CN202210037268.7在审
发明人： 潘琪芳;缪晴;唐克轩 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2022-01-13 - 公布日： 2022-03-25 - 主分类号： B01D11/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种天然低共熔溶剂及其制备方法和应用于提取叶黄素，涉及天然产物的提取领域；该天然低共熔溶剂的成分包括1,2‑丙二醇和乳酸；其制备方法为：将1,2‑丙二醇和乳酸混合，并在80℃下加热10min后得到所述天然低共熔溶剂；该天然低共熔溶剂应用于从万寿菊中提取叶黄素。本发明提供的天然低共熔溶剂来提取万寿菊中的叶黄素，与传统乙醇提取相比，可有效提高万寿菊中叶黄素的提取率，而且缓解了传统溶剂不环保的缺陷，具有无毒、易合成、生产成本低廉、生物可降解、环境友好等特点；同时，还避免了醇提法需要回收溶剂造成的工艺繁琐、用时长、不环保的缺陷。
一种天然低共熔溶剂及其制备方法应用于提取叶黄素

[发明专利]一种青蒿HD-ZIP IV类转录因子编码序列及应用-CN201610729489.5有效
发明人：唐克轩;陈明慧;颜廷祥;沈乾;潘琪芳;付雪晴 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2016-08-25 - 公布日： 2020-02-07 - 主分类号： C12N15/29 文献下载
摘要：本发明公开了一种青蒿HD‑ZIP IV类转录因子编码序列，该编码序列记为AaHD1，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。利用转基因技术将青蒿AaHD1转录因子超表达载体转化青蒿可以有效调控青蒿表皮的腺毛密度，从而提高青蒿素的含量。在非转基因普通青蒿的叶片表皮腺毛密度为15个每平方毫米，超表达AaHD1基因表达的转基因青蒿的叶片腺毛密度提高到25个每平方毫米。与之对应的青蒿素含量从非转基因青蒿的9mg/g DW提高到13mg/g DW，该发明对于为青蒿素的规模化生产提供高产、稳定新药源具有重要意义。
青蒿青蒿素编码序列平方毫米转录因子非转基因青蒿氨基酸序列超表达载体规模化生产核苷酸序列转基因技术转基因青蒿非转基因基因表达叶片表皮有效调控重要意义超表达新药源表皮叶片转化

[发明专利]一种青蒿bZIP类转录因子编码序列及克隆方法与应用-CN201610680529.1有效
发明人：唐克轩;沈乾;马亚男;吕宗友;潘琪芳;唐岳立 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2016-08-17 - 公布日： 2019-12-10 - 主分类号： C12N15/29 文献下载
摘要：本发明公开了一种青蒿AabZIP6基因编码序列的克隆及其应用。具体包括基因AabZIP6的克隆、含有该基因的植物表达载体的构建、该基因对青蒿素生物合成途径特有基因启动子的激活作用。上述青蒿AabZIP6基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还公开了AabZIP6基因具有能够激活青蒿素生物合成途径特异基因ADS和ALDH1表达的特性。本发明中AabZIP6基因可应用于青蒿品质改良，可提高青蒿中青蒿素的含量。
一种青蒿 bzip 转录因子编码序列克隆方法应用

[发明专利]青蒿转运蛋白AaPDR3及其应用-CN201610957142.6有效
发明人：唐克轩;付雪晴;石璞;何倩;沈乾;唐岳立;潘琪芳;黎凌;孙小芬 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2016-10-27 - 公布日： 2019-09-24 - 主分类号： C07K14/415 文献下载
摘要：一种青蒿转运蛋白AaPDR3及其应用，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；该青蒿转运蛋白AaPDR3在青蒿非分泌型腺毛中影响倍半萜石柱烯的合成。该转运蛋白由如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列编码。本发明进一步提出了一种具有青蒿转运蛋白AaPDR3的转基因青蒿苗实现方法。
青蒿转运蛋白 aapdr3 及其应用

[发明专利]双基因融合增强植物抗蚜性的方法-CN201711082638.4在审
发明人：唐克轩;马嘉伟;潘琪芳;付雪晴;张婷婷;钱虹妹;赵静雅;马亚男;王宇婷;孙小芬 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2017-11-07 - 公布日： 2018-04-20 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：一种双基因融合增强植物抗蚜性的方法，通过从桃蚜(Myzus×persicae)的V‑ATPase subunit E基因和COO2基因片段中构建得到上述具有抗蚜虫功能的基因，通过构建表达载体并将该载体转入农杆菌，以该农杆菌侵染小麦幼胚，在小麦中表达产生V‑ATPase subunit E和COO2双基因的dsRNA，从而达到趋避蚜虫的目的。此外，实验证明通过转化双基因融合载体的转基因小麦抗虫效果高于分别转化单基因的转基因小麦。本发明利用基因工程手段获得的抗虫转基因植物具有只对目标害虫有效，而对非危害生物没有影响的优点，植物表达产生的抗虫物质存在于植物体内，不会对环境造成污染，且成本低，利于推广。
基因融合增强植物抗蚜性方法

[发明专利]植物生长调节剂处理提高长春花中生物碱含量的方法-CN201410403658.7有效
发明人：唐克轩;潘琪芳;王玉亮;孙光新;刘品 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2014-08-15 - 公布日： 2016-11-23 - 主分类号： A01N57/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种植物生长调节剂处理提高长春花中生物碱含量的方法；将长春花种子于泥炭蛭石珍珠岩培养基质中发苗并生长，在长春花进入花期后，将不同的植物生长调节剂(乙烯利、甲基茉莉酸)混合制成浓度皆为0.1mM的混合剂对长春花植株进行喷洒处理，处理后1～2天长春花中的文多灵、长春质碱以及长春碱含量普遍得到提高，采收处理后的长春花植株将有效提高长春花生物碱类的产量，并降低其生产成本，对满足长春花抗癌生物碱产业化生产具有重要意义。
植物生长调节剂处理提高长春花生物碱含量方法

[发明专利]共转orca3/g10h基因提高长春花中长春花类生物碱含量的方法-CN201210166532.3有效
发明人：唐克轩;赵静雅;王名雪;潘琪芳;徐菲 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2012-05-24 - 公布日： 2012-10-03 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：本发明涉及一种共转orca3/g10h基因提高长春花中长春花类生物碱含量的方法，所述方法包括如下步骤：克隆orca3基因和g10h基因；分别构建orca3基因和g10h基因的表达盒，然后依次将表达盒置于双元表达载体pCAMBIA2300中，构建含orca3和g10h基因的植物双元表达载体；通过冻融法转化根癌农杆菌获得工程菌；通过农杆菌介导法转化长春花并再生出植株；PCR检测基因orca3/g10h的整合情况测定转基因长春花中长春花类生物碱的含量，筛选获得生物碱类含量提高的转基因长春花植株。本发明提供了一种高产、稳定的长春花生物碱药源，有利于大规模、低成本生产长春花类生物碱。
orca3 g10h 基因提高长春花生物碱含量方法

[发明专利]利用长春花下胚轴培育再生植株的方法-CN200910195774.3有效
发明人：唐克轩;潘琪芳;王荃;袁芳;王国丰;刑世海;赵静雅 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2009-09-17 - 公布日： 2010-03-17 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：一种生物技术领域的利用长春花下胚轴培育再生植株的方法，包括如下步骤：取长春花种子，置于MS培养基上培养，待长出第一对子叶之时，取下胚轴，置于愈伤组织诱导培养基上进行培养，得愈伤组织；将愈伤组织接种到分化培养基上进行培养，得绿色愈伤组织；将绿色愈伤组织接种到不定芽诱导培养基上进行培养，得不定芽；取不定芽，置入生根培养基中进行培养，得试管苗；取试管苗，利用快速繁殖培养基进行快速繁殖，得再生植株。本发明的方法使得长春花下胚轴的不定芽分化率达81％，不定芽生根率为100％。
利用长春花胚轴培育再生植株方法

[发明专利]培育根癌农杆菌介导的长春花转基因植株的方法-CN200910195775.8有效
发明人：唐克轩;王荃;潘琪芳;袁芳;王国丰;刑世海;赵静雅 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2009-09-17 - 公布日： 2010-03-10 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：一种生物技术领域的培育根癌农杆菌介导的长春花转基因植株的方法，包括如下步骤：取长春花无菌苗，获取无菌苗的下胚轴；制备根癌农杆菌菌液，利用根癌农杆菌介导长春花下胚轴的转化；取下胚轴，置于愈伤组织诱导培养基上进行培养，得愈伤组织；将愈伤组织接种到分化培养基上进行培养，得绿色愈伤组织；将绿色愈伤组织接种到不定芽诱导培养基上进行培养，得不定芽；取不定芽，置入生根培养基中进行培养，得长春花转基因植株。本发明建立了稳定的根癌农杆菌介导的长春花遗传转化体系，为进一步研究代谢途径调控网络和提高TIAs的含量奠定了基础，能进一步应用到生产TIAs代谢产物的基因工程育种中。
培育根癌农杆菌长春花转基因植株方法

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