本发明公开了石骨症的基因编辑体系及其应用。该基因编辑体系包括:CRISPR/Cas编辑系统,包括sgRNA,sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示;外源模板,外源模板包含如SEQ ID No.2~3中至少一种所示的核苷酸序列。根据本申请实施例的基因编辑体系,至少具有如下有益效果:本申请中所提供的基因编辑体系针对特定的石骨症突变位点设计引导RNA和修复模板,利用CRISPR/Cas编辑系统特异性剪切目标序列,引导同源重组修复过程,从而高效地完成R286W突变位点的修复。
本发明公开了一种CircRNA,其序列如SEQ ID NO:1所示;并且进一步公开了检测该CircRNA的RT‑PCR的引物。该CircRNA在唐氏综合征病人与正常人群体内表达具有比较明显的表达差异,目前用于唐氏综合征的临床辅助诊断技术尚不完善,因此该CircRNA具有作为唐氏综合征相关的生物标志物的潜能。
本发明公开了一种新的环状RNA:hsa_circRNA_104907,其序列如SEQ ID NO:1所示;同时也进一步公开了检测该环状RNA的RT‑PCR引物。相较于正常人群而言,该环状RNA在唐氏综合征病人体内表达显著上升,并且这种表达的上升具有统计学意义上的相关性。因此,该环状RNA具有作为唐氏综合征相关的生物标志物的潜能。
本发明提供了一种特异性靶向CLCN7基因的sgRNA及其应用。该特异性靶向CLCN7的sgRNA的核苷酸序列包括SEQ ID No.1~2的任一种。为了实现对CLCN7基因的编辑,首先根据该基因的识别序列设计特异性sgRNA,为了尽量避免脱靶效应的出现,在设计sgRNA时通过对其潜在脱靶位点的预测,减少sgRNA与脱靶位点的碱基配对数。遵循上述原则,在CLCN7基因的外显子区设计了两条长20bp的sgRNA,其靶点序列的间隔为3bp,其后端紧邻PAM(前间区序列邻近基序,NGG)。通过该sgRNA构建表达CRISPR/Cas9能够有效对CLCN7实现基因的编辑,从而为下一步CLCN7致病位点突变的修复提供参考。