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[发明专利]一种可提高蛋白表达量的丝素蛋白序列标签及其应用-CN202111282883.6有效
发明人：郭杨;刘文帅;年锐;于建立;樊喜英 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2021-11-01 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C07K14/435 文献下载
摘要：一种可提高蛋白表达量的丝素蛋白序列标签及其应用，属于生物技术领域。为解决大规模生产中纳米抗体表达量低的问题，本发明提供了一种通过添加丝素蛋白序列标签来促进蛋白表达的方法，所述丝素蛋白序列标签为天然丝素蛋白中的高频肽段GAGAGS，或为对高频肽段GAGAGS重复1～50次获得的肽段。将本发明所述的丝素蛋白标签与纳米抗体在大肠杆菌中进行融合表达，提取蛋白溶液后，进行镍柱纯化，可获得具有高表达量特点的纳米抗体，并且不影响纳米抗体的活性。本发明提供的促表达方法步骤简单，促表达效果明显，成本低，适用范围广，符合常规工业大批量生产要求。
一种提高蛋白表达丝素序列标签及其应用

[发明专利]一种纳米抗体介导的双重肿瘤靶向介孔二氧化硅纳米载药制剂及其制备方法-CN202111489273.3在审
发明人：王婷婷;樊喜英;年锐;刘文帅;孙国川;古一;牟汝华 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2021-12-07 - 公布日： 2023-06-09 - 主分类号： A61K47/69 文献下载
摘要：一种纳米抗体介导的双重肿瘤靶向介孔二氧化硅纳米载药制剂及其制备方法。本发明属于药物制剂领域。本发明的目的是为了解决现有靶向纳米载药制剂存在的受体配体特异性结合作用力差而导致容易脱靶的技术问题。本发明的一种纳米抗体介导的双重肿瘤靶向介孔二氧化硅纳米载药制剂由药物、包载药物的载体及靶向材料构成，所述载体为介孔二氧化硅纳米粒，所述靶向材料为透明质酸和纳米抗体偶联而成的具有双靶向功能的分子。本发明的透明质酸和纳米抗体肿瘤靶向纳米粒的制备方法简单、反应条件温和，药物释放具有明显的pH及氧化还原响应性，并且具有良好的生物相容性和肿瘤靶向性，精准杀伤肿瘤细胞而对正常细胞影响较小。
一种纳米抗体双重肿瘤靶向二氧化硅制剂及其制备方法

[发明专利]一种用于生产磺基化重组水蛭素的重组菌及其制备方法与应用-CN202010444223.2有效
发明人：孙粤;包子娴;年锐;莱东;咸漠;刘文帅;樊喜英;陈泉 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2020-05-22 - 公布日： 2023-03-28 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：一种用于生产磺基化重组水蛭素的重组菌及其制备方法与应用，属于基因工程技术领域。为了提高磺基化重组水蛭素的合成产量，降低生产成本，本发明提供了一种用于生产磺基化重组水蛭素的重组菌，所述重组菌过表达磺基化酶基因和水蛭素基因，出发菌株为大肠杆菌；所述水蛭素基因，核苷酸序列为SEQ ID No.1‑SEQ ID No.3中的一种，所述磺基化酶基因，核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。本发明显著提升了重组水蛭素的活性，且实现了水蛭素的一步纯化方法，能够一次性获得具有较高纯度的重组水蛭素产物，这极大的减轻了后续纯化的压力。
一种用于生产磺基化重组水蛭及其制备方法应用

[发明专利]一种丝素蛋白纳米粒的制备方法-CN202210491649.2在审
发明人：王婷婷;樊喜英;年锐;刘文帅 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2022-04-29 - 公布日： 2022-07-26 - 主分类号： C08J3/14 文献下载
摘要：一种丝素蛋白纳米粒的制备方法，属于生物医学技术领域。为了获得粒径均一、尺寸更小的丝素蛋白纳米粒，本发明将蚕丝脱丝胶后获得的丝素蛋白，利用LiBr溶解，经透析获得一定浓度的再生丝素蛋白溶液，然后通过超滤分离、冷冻干燥获得不同分子量的再生丝素蛋白RSF，再利用无水乙醇诱导的自组装法制备了丝素蛋白纳米粒。本发明通过超滤获得的分子量30～50KDa及50KDa的丝素蛋白RSF(30～50KDa)和RSF(50KDa)自组装形成的丝素蛋白纳米粒SFNPs(30～50KDa)和SFNPs(50KDa)的粒径均一、尺寸更小，作为药物递送载体有利于细胞摄取及药物控制释放。
一种丝素蛋白纳米制备方法

[发明专利]制备溶液渗透性目的蛋白沉淀物及从宿主细胞中分离纯化目的蛋白的方法-CN201811257915.5有效
发明人：包子娴;孙粤;年锐;咸漠;陈泉;刘文帅;彭馨莹;樊喜英 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2018-10-26 - 公布日： 2022-07-15 - 主分类号： C07K1/36 文献下载
摘要：本发明公开了制备溶液渗透性目的蛋白沉淀物及从宿主细胞中分离纯化目的蛋白的方法，属于蛋白纯化技术领域。本发明通过用沉淀盐和透析盐冲洗含有目的蛋白的沉淀物，获得了具有溶液渗透性的目的蛋白沉淀物。本发明分离纯化目的蛋白的方法是利用辛酸、尿囊素和TREN粒子处理含有目的蛋白的宿主细胞收集物，获得的澄清收集液经过滤后，加入含有聚乙二醇和NaCl的缓冲液或者是含有硫酸铵和NaCl的缓冲液进行初步沉淀目的蛋白，利用沉淀盐和高浓度透析盐对蛋白沉淀物冲洗，获得具有溶液渗透性的目的蛋白沉淀物，通过色谱层析进一步纯化得高纯度目的蛋白。该方法纯化效果好，成本低，适用于蛋白纯化过程。
制备溶液渗透性目的蛋白沉淀物宿主细胞分离纯化方法

[发明专利]一种强粘附性、高机械强度的PEGDA-贻贝粘附蛋白-胶原蛋白复合水凝胶的制备方法-CN201910470383.1有效
发明人：包子娴;孙粤;年锐;咸漠;樊喜英;陈泉;刘文帅;彭馨莹 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2019-05-31 - 公布日： 2022-06-03 - 主分类号： C08J3/28 文献下载
摘要：一种强粘附性、高机械强度的PEGDA‑贻贝粘附蛋白‑胶原蛋白复合水凝胶的制备方法，属于水凝胶技术领域。为了提高胶原蛋白水凝胶的机械强度和组织粘附性，本发明提供了一种强粘附性、高机械强度的PEGDA‑贻贝粘附蛋白‑胶原蛋白复合水凝胶的制备方法，该方法是将贻贝粘附蛋白溶解于乙酸溶液，获得贻贝粘附蛋白乙酸溶液，将胶原蛋白固体溶解于贻贝粘附蛋白乙酸溶液，获得贻贝粘附蛋白‑胶原蛋白溶液，碱中和pH至5‑9，加入PEGDA固体至完全溶解，加入光起始因子，紫外光交联形成PEGDA‑贻贝粘附蛋白‑胶原蛋白复合水凝胶。本发明制备工艺简单、易操作，在组织工程、医学等领域具有广阔的应用前景。
一种粘附机械强度 pegda 贻贝蛋白胶原复合凝胶制备方法

[发明专利]一种蛋白分离纯化的方法-CN201811383933.8有效
发明人：刘文帅;年锐;孙粤;包子娴;樊喜英;咸漠 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2018-11-20 - 公布日： 2021-08-17 - 主分类号： C07K1/18 文献下载
摘要：一种蛋白分离纯化的方法，属于蛋白纯化技术领域。本发明为了能够大剂量纯化出纯度较高的蛋白，本发明提供了一种蛋白分离纯化的方法，包括如下步骤：制备正电荷分子筛：将不带电荷的分子筛树脂与有机溶剂混合，在变性剂和保护剂的作用下，在140‑160℃下反应的时间为24‑48h，制备获得复合分子筛树脂，再加入酸性溶液抽滤洗涤至中性，干燥后获得正电荷分子筛；将待纯化的蛋白样品经步骤1)获得的正电荷分子筛过滤，获得的滤液经尺寸排阻色谱层析对蛋白进行纯化，或者将获得的滤液经阴离子交换层析对蛋白进行纯化，获得纯化溶液。本发明使用于工业化生产目的蛋白。
一种蛋白分离纯化方法

[发明专利]一种用于蛋白沉淀的装置及从蛋白混合液中分离纯化目的蛋白的方法-CN201910064297.0在审
发明人： 樊喜英;刘文帅;年锐;孙粤;包子娴;咸漠 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2019-01-23 - 公布日： 2020-07-31 - 主分类号： C07K1/36 文献下载
摘要：一种用于蛋白沉淀的装置及从蛋白混合液中分离纯化目的蛋白的方法，属于蛋白纯化技术领域。为解决现有沉淀盐纯化蛋白的过程中引发的以下问题：1)局部盐浓度过大引起蛋白质分子发生变性问题；2)因为沉淀盐和蛋白混合液混合不均发生盐析现象。本发明提供了一种沉淀盐溶液与蛋白混合液充分混匀的装置，利用该装置对沉淀盐溶液纯化目的蛋白的过程进行优化，过滤去除未发生沉淀的蛋白，同时截留已经沉淀的目的蛋白于滤膜中，有效简化纯化流程同时可用于大体积的蛋白纯化。经过该装置沉淀的目的蛋白再经过一步离子交换色谱柱的纯化，即可将杂蛋白全部去除，得到纯度达95％以上的目的蛋白，具有极高的经济效益，本发明可用于蛋白分离与纯化。
一种用于蛋白沉淀装置混合液分离纯化目的方法

[发明专利]一种纳米抗体分离纯化的方法-CN201811636872.1在审
发明人：刘文帅;樊喜英;年锐;孙粤;包子娴;咸漠 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2018-12-29 - 公布日： 2020-07-07 - 主分类号： C07K16/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种纳米抗体分离纯化的方法，涉及生物技术领域，括如下步骤：1)低pH沉淀杂蛋白：将待纯化样品用酸性溶液调节pH至酸性，静置后，离心去除沉淀，留取上清溶液；2)高温沉淀杂蛋白：将经步骤1)获得的上清溶液加热，保温静置后，离心去除沉淀，留取上清溶液；3)超滤法去除杂蛋白：将经步骤2)获得的上清溶液进行超滤，透过超滤膜的蛋白溶液即为高纯度纳米抗体。本发明提供的方法不影响纳米抗体的活性，而且操作简单，成本低，适用范围广。
一种纳米抗体分离纯化方法

[发明专利]一种复用对流色谱系统及其用于纯化蛋白的方法-CN201811529395.9在审
发明人：包子娴;孙粤;年锐;咸漠;陈泉;刘文帅;彭馨莹;樊喜英 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2018-12-13 - 公布日： 2020-06-23 - 主分类号： B01D36/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种复用对流色谱系统及其用于纯化蛋白的方法，属于蛋白纯化技术领域。该复用对流色谱系统包括进料储液罐，蠕动泵I，切向流过滤装置，循环液储液罐，蠕动泵II，蠕动泵III，废弃滤液储液罐，蠕动泵IV，蠕动泵V，大孔连续色谱装置和中央处理器。本发明还提供了一种利用复用对流色谱系统纯化蛋白的方法。该系统集细胞上清液的浓缩、缓冲液置换、纯化以及最后产品的配方于一体，实现了由细胞液回收到最后产品纯化的一步操作。该系统还可以进一步集成紫外光探测、pH、电导仪等实现对整个纯化过程的实时监测，最终建立高效、简便、经济的实验室、中试规模抗体生产平台，在各种蛋白纯化中试平台具有很大的应用前景。
一种对流色谱系统及其用于纯化蛋白方法

[实用新型]一种复用对流色谱系统-CN201822092505.1有效
发明人：包子娴;孙粤;年锐;咸漠;陈泉;刘文帅;彭馨莹;樊喜英 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2018-12-13 - 公布日： 2019-09-10 - 主分类号： B01D36/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种复用对流色谱系统，属于蛋白纯化技术领域。该复用对流色谱系统包括进料储液罐1，蠕动泵I，切向流过滤装置，循环液储液罐，蠕动泵II，蠕动泵III，废弃滤液储液罐，蠕动泵IV，蠕动泵V，大孔连续色谱装置和中央处理器。本实用新型还提供了一种利用复用对流色谱系统纯化蛋白的方法。该系统集细胞上清液的浓缩、缓冲液置换、纯化以及最后产品的配方于一体，实现了由细胞液回收到最后产品纯化的一步操作。该系统还可以进一步集成紫外光探测、pH、电导仪等实现对整个纯化过程的实时监测，最终建立高效、简便、经济的实验室、中试规模抗体生产平台，在各种蛋白纯化中试平台具有很大的应用前景。
蠕动泵色谱系统复用对流储液罐本实用新型切向流过滤装置蛋白纯化技术中央处理器紫外光探测产品纯化纯化蛋白蛋白纯化抗体生产连续色谱实时监测中试规模电导仪缓冲液上清液细胞液循环液大孔配方置换废弃浓缩细胞回收应用

[发明专利]一种高质量可放大型鱼胶原蛋白提取纯化方法-CN201810711297.0在审
发明人：孙粤;年锐;咸漠;包子娴;陈泉;刘文帅;樊喜英 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2018-06-28 - 公布日： 2018-10-12 - 主分类号： C12P21/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种高质量可放大型鱼胶原蛋白提取纯化方法，属于鱼胶原蛋白提取纯化技术领域。该方法是将冻干鱼皮剪碎后加入氢氧化钠溶液和过氧化氢溶液的混合溶液，搅拌后离心；向沉淀中加入异丙醇溶液，搅拌后离心；向沉淀中加入盐酸胍溶液，搅拌离心；向沉淀中加入乙酸溶液，再加入胃蛋白酶，搅拌后离心；向上清液中边搅拌边滴加入氯化钠‑乙酸母液，搅拌后离心；向沉淀中加入乙酸溶液溶解沉淀后透析；透析后将透析袋内的沉淀溶解于乙酸溶液中，加到正压过滤设备，用微孔滤膜过滤上清得蛋白溶液；先用乙酸溶液透析，再用水透析，得到胶原凝胶，冻干后即得胶原蛋白。获得的蛋白产物结构完整，生物活性保持完好，可直接用于医用及组织工程材料。
沉淀鱼胶原蛋白提取纯化乙酸溶液放大型冻干透析氯化钠过氧化氢溶液氢氧化钠溶液微孔滤膜过滤乙酸溶液溶解乙酸溶液透析组织工程材料乙酸盐酸胍溶液异丙醇溶液沉淀溶解蛋白产物蛋白溶液混合溶液胶原蛋白胶原凝胶生物活性胃蛋白酶用水透析正压过滤透析袋剪碎母液清液鱼皮

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