本发明公开了一种巴氏新小绥螨对阿维菌素抗性的分子标记,核苷酸序列如SEQ ID No.3所示,及扩增该标记的引物4F/4R;还公开了分子标记在巴氏新小绥螨对阿维菌素敏感品系和抗性品系分类中的应用;还公开了巴氏新小绥螨对阿维菌素抗性的分子标记的检测方法:先提取待测巴氏新小绥螨的总DNA,以总DNA为模板用引物4F/4R进行PCR扩增,得到包含突变区域的NbGluCl基因片段,将得到的基因片段与SEQ ID No.3所示的巴氏新小绥螨对阿维菌素抗性的分子标记进行序列比对,即可判断该品系是对阿维菌素的敏感品系或抗性品系。该标记的特异性强、稳定性高,可分析出待测样本是对阿维菌素的敏感品系还是抗性品系。