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[发明专利]一种具有群体感应特征的启动子及其应用-CN202111192261.4有效
发明人： 李由然;石贵阳;陈媛;张梁;丁重阳;徐沙;顾正华 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-10-13 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了一种具有群体感应特征的启动子及其应用，具有与SEQ ID NO.1所示的序列同源性≥95％的核酸序列，本发明提供的启动子Ptr1来源于地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis BL2)。本发明所述启动子具有前期(1‑5h)表达极弱，后期(16‑48h)表达脉冲型增长的特性，是响应群体密度的自诱导高效表达系统。本发明提供的启动子确保细菌种群达到一定数量后才产生目标产物，无需添加诱导剂，保证了细胞在“生长”与“生产”两相之间进行适时的转变。
一种具有群体感应特征启动子及其应用

[发明专利]一种超声波控制菌丝球粒径及其生产柠檬酸的方法-CN202111026526.3有效
发明人： 李由然;石贵阳;金赛;卢佳伟;孙福新;张成;姜华;胡志杰;蒋小东 -专利权人：江南大学;江苏国信协联能源有限公司
申请日： 2021-09-02 - 公布日： 2023-09-15 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种超声波控制菌丝球粒径的方法及其应用。本发明所述方法包括如下步骤：(1)种子培养基的制备；(2)将步骤(1)制备的种子培养基灭菌、冷却后，接入曲霉孢子，培养得到含曲霉菌丝球的种子液；(3)对步骤(2)含曲霉菌丝球的种子液进行超声处理，得到含不同粒径的菌丝球的种子液；将含不同粒径菌丝球的种子液加入发酵培养基中搅拌发酵得到柠檬酸发酵液。本发明方法有利于柠檬酸发酵实现高浓度、高转化率和高效率的统一，对柠檬酸产业技术提升具有重要促进作用。
一种超声波控制菌丝粒径及其生产柠檬酸方法

[发明专利]一种启动子及促进地衣芽孢杆菌产海藻糖生产用酶的应用-CN202210327095.2有效
发明人： 李由然;石贵阳;陆一鸣 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-03-30 - 公布日： 2023-09-12 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了一种启动子及促进地衣芽孢杆菌产海藻糖生产用酶的应用，属于发酵工程领域。本发明通过人工改造PP2启动子调控区域，构建了一个活性提高的启动子1upPP2，并利用该启动子在地衣芽孢杆菌中分别表达麦芽糖基海藻糖合成酶和麦芽糖基海藻糖水解酶，使酶活分别提高了37％和10％。本发明还通过优化发酵培养基，使携带1upPP2的重组菌麦芽糖基海藻糖合成酶和麦芽糖基海藻糖水解酶的酶活分别达到2572.5U/mL、358.0U/mL。本发明构建的启动子简单高效，对提高地衣芽孢杆菌表达系统表达水平有实际意义。
一种启动子促进地衣芽孢杆菌海藻生产应用

[发明专利]一种区别不同基原桑黄类真菌的方法与应用-CN202310656063.1在审
发明人：张梁;李默影;顾正华;庞欣;辛瑜;郭自涛;李由然;丁重阳;石贵阳 -专利权人：宜兴食品与生物技术研究院有限公司;江南大学
申请日： 2023-06-05 - 公布日： 2023-09-01 - 主分类号： G01N30/88 文献下载
摘要：本发明公开了一种区别不同基原桑黄类真菌的方法与应用。本发明所述方法为：将桑黄样品预处理；用UPLC‑Q‑TOF‑MSE进行数据非依赖模式采集数据，将采集的数据分别进行FBMN构建及可视化，得到每个桑黄的分子网络图形；再将所采集的不同基原桑黄的数据同时进行FBMN构建及可视化，得到桑黄样品的分子网络图形；最后对比桑黄样品的分子网络图形与每个桑黄样品的分子网络图形，即可判断是否属于同一基原。本发明将UPLC‑Q‑TOF‑MSE与非依赖模式采集数据结合，实现了桑黄的FBMN构建及不同基原桑黄的区分，还可区分特定组分在不同基原桑黄中的含量，为桑黄的基原鉴定及成分利用提供了新的思路和方法。
一种区别不同基原桑黄类真菌方法应用

[发明专利]一种利用地衣芽孢杆菌连续制备D-阿洛酮糖的方法-CN202310663057.9在审
发明人： 李由然;石贵阳;吴志勇 -专利权人：无锡特殊食品与营养健康研究院有限公司
申请日： 2023-06-06 - 公布日： 2023-09-01 - 主分类号： C12M1/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用地衣芽孢杆菌连续制备D‑阿洛酮糖的方法，属于生物技术领域。包括以下步骤：发酵重组地衣芽孢杆菌，回收细胞作为催化剂；在配料罐中配制D‑果糖溶液；将果糖溶液与细胞催化剂混合，泵入微滤装置；使微滤获得的清液进入串联于微滤装置的模拟移动床以分离底物和产物，而含细胞催化剂的混液回流至反应罐进行连续反应；模拟移动床分离获得的D‑阿洛酮糖进一步粗提及精制，而D‑果糖与混液一起回流至配料罐连续反应。本发明采用的地衣芽孢杆菌细胞催化剂在高温下可稳定地连续重复使用。微滤装置与模拟移动床的串联，将可逆反应的平衡持续向产物合成的方向推动，反应效率高，适合工业规模的连续化生产。
一种利用地衣芽孢杆菌连续制备阿洛酮糖方法

[发明专利]肠道微生物来源的岩藻糖基转移酶及其应用-CN202310567614.7在审
发明人： 李由然;石贵阳;吴志勇;陈权 -专利权人：无锡特殊食品与营养健康研究院有限公司
申请日： 2023-05-19 - 公布日： 2023-09-01 - 主分类号： C12N9/10 文献下载
摘要：本发明公开了肠道微生物来源的岩藻糖基转移酶及其应用，属于合成生物学和基因工程技术领域。本发明提供了从肠道微生物中筛选的具有α‑1,2特异性的岩藻糖基转移酶及其编码基因，利用基因重组技术，将这些岩藻糖基转移酶的编码基因在地衣芽孢杆菌中异源表达，所获得的重组菌株可用于2’‑岩藻糖基乳糖的发酵生产。本发明所发现的岩藻糖基转移酶催化活力高，且最适催化温度与细菌的高温发酵所匹配，在母乳寡糖的发酵生产等应用中具有很大的潜力。
肠道微生物来源糖基转移酶及其应用

[发明专利]肠道微生物来源的岩藻糖基转移酶及其应用-CN202310567599.6在审
发明人： 李由然;石贵阳;吴志勇;陈权 -专利权人：无锡特殊食品与营养健康研究院有限公司
申请日： 2023-05-19 - 公布日： 2023-08-25 - 主分类号： C12N9/10 文献下载
摘要：本发明公开了肠道微生物来源的岩藻糖基转移酶及其应用，属于合成生物学和基因工程技术领域。本发明提供了从肠道微生物中筛选的具有α‑1,2特异性的岩藻糖基转移酶及其编码基因，利用基因重组技术，将这些岩藻糖基转移酶的编码基因在地衣芽孢杆菌中异源表达，所获得的重组菌株可用于2’‑岩藻糖基乳糖的发酵生产。本发明所发现的岩藻糖基转移酶催化活力高，且最适催化温度与细菌的高温发酵所匹配，在母乳寡糖的发酵生产等应用中具有很大的潜力。
肠道微生物来源糖基转移酶及其应用

[发明专利]一株α-法尼烯合成酿酒酵母工程菌的构建及应用-CN202310436611.X在审
发明人：石贵阳;王均华;李由然;朱惠霖;张梁;丁重阳;徐沙;顾正华 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-04-21 - 公布日： 2023-08-18 - 主分类号： C12N9/88 文献下载
摘要：本发明公开了一株α‑法尼烯合成酿酒酵母工程菌的构建及应用，属于合成生物学技术领域。本发明整合表达了甲羟戊酸途径基因和α‑法尼烯合酶编码基因，提高了IPP和DMAPP供给能力，并回补缺陷型基因HIS3、TRP1、LYS2、LEU2和URA3提高了菌体生物量；本发明还通过表达双拷贝Fsso基因促进α‑法尼烯的积累。本发明构建的优势基因工程菌摇瓶发酵最高能够积累待续3.58g/Lα‑法尼烯，5L发酵罐最高能够积累待续26.16g/Lα‑法尼烯。
法尼烯合成酿酒酵母工程构建应用

[发明专利]一株香叶基香叶醇合成酿酒酵母工程菌的构建及应用-CN202310437712.9在审
发明人：石贵阳;王均华;李由然;朱惠霖;张梁;丁重阳;徐沙;顾正华 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-04-21 - 公布日： 2023-07-04 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一株香叶基香叶醇合成酿酒酵母工程菌的构建及应用，属于合成生物学技术领域。本发明在染色体整合表达MVA途径基因，提高了IPP和DMAPP供给能力，并回补缺陷型基因HIS3、TRP1、LYS2、LEU2和URA3提高了菌体生物量。本发明还通过表达双拷贝PaGGPPs‑ERG20和PaGGPPs‑DPP1基因促进香叶基香叶醇的积累，表达NADH依赖型spHMGR基因和弱化甾醇合成途径代谢流进一步促进香叶基香叶醇的积累。本发明构建的基因工程菌摇瓶发酵能够积累1.2g/L香叶基香叶醇，5L发酵罐能够积累5.57g/L香叶基香叶醇。
一株香叶基香叶醇合成酿酒酵母工程构建应用

[发明专利]一种柠檬酸清洁生产工艺-CN202310081945.X在审
发明人：金赛;陈坚;李由然;石贵阳;刘龙;孙福新;周东姣;卢佳伟 -专利权人：江苏国信协联能源有限公司;江南大学
申请日： 2023-02-08 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12P7/48 文献下载
摘要：本发明公开了一种柠檬酸清洁生产工艺。本发明所述清洁生产工艺为：将原料与冷凝水混合调pH得到混合液；进行两次加酶、两次喷射液化得到液化液；将部分液化液经板框过滤，得到糖液；另一部分液化液中加入冷凝水，配制成种子培养基，接入黑曲霉孢子制备种子液；将剩余液化液与上述糖液混合后，加冷凝水制备发酵培养基，加入种子液培养得到发酵液；发酵液经固液分离，提取，得到柠檬酸和提取废液；将提取废液加热后，调pH，蒸发得到浓缩液，同时收集冷凝水。本发明所述方法有效降低了浓缩过程产生冷凝水的挥发酸含量，避免冷凝水回用对黑曲霉产柠檬酸产生的抑制，在柠檬酸有机废水资源化制备的同时实现了水资源循环和热能的回收利用。
一种柠檬酸清洁生产工艺

[发明专利]一种重组地衣芽孢杆菌全细胞转化产(R)-柠苹酸的方法-CN202211287737.7在审
发明人： 李由然;石贵阳;沈佳颖 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-10-20 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组地衣芽孢杆菌全细胞转化产(R)‑柠苹酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明在地衣芽孢杆菌中异源表达柠苹酸合酶，搭建了(R)‑柠苹酸合成途径，以葡萄糖为底物，建立及优化了重组菌株进行全细胞转化产(R)‑柠苹酸的条件，实现了(R)‑柠苹酸的合成与积累，转化120h可生成(R)‑柠苹酸8.57g/L，转化率为142.84mg/g葡萄糖，具有制备简单、生产成本低、抗环境压力能力强、副产物少和产率高等优点。
一种重组地衣芽孢杆菌细胞转化柠苹酸方法

[发明专利]一种催化香紫苏醇生产香紫苏内酯的方法-CN202110785213.X有效
发明人：张梁;望子龙;方亚坤;辛瑜;顾正华;李由然;徐沙;丁重阳;石贵阳 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-07-12 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12P17/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种催化香紫苏醇生产香紫苏内酯的方法，所述方法包括如下步骤：(1)子囊菌纲Filobasidium属的真菌经过种子培养，制得种子液；(2)按照发酵培养基的体积的5％‑10％的量将步骤(1)所得种子液接入含有香紫苏醇及所需营养物质的发酵培养基中，置于恒温摇床中25‑30℃培养60‑84h，制得含香紫苏内酯的发酵液；所述发酵培养基中含有助溶剂。本发明在发酵体系中添加助溶剂，可以提高底物香紫苏醇在发酵体系中溶解进而提高香紫苏醇的转化率和香紫苏内酯的产量。
一种催化紫苏生产内酯方法

[发明专利]一种可以稳定重复用于D-阿洛酮糖转化合成的地衣芽孢杆菌细胞-CN202211176218.3在审
发明人： 李由然;石贵阳 -专利权人：无锡特殊食品与营养健康研究院有限公司
申请日： 2022-09-26 - 公布日： 2023-05-05 - 主分类号： C12N15/61 文献下载
摘要：本发明公开了一种可以稳定重复用于D‑阿洛酮糖转化合成的地衣芽孢杆菌细胞，属于生物技术领域领域。D‑阿洛酮糖是一种具有较高健康价值的功能性糖，在食品、医药、保健等领域具有广泛的应用前景。本发明的地衣芽孢杆菌细胞高效表达了重组的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶，可以高浓度的果糖为底物转化生成D‑阿洛酮糖。所述的全细胞催化剂重复使用10次后，转化率不低于30％。相对于纯酶或者一次性使用的全细胞转化方式，本技术合成D‑阿洛酮糖具有催化剂使用成本低，分离纯化简单等显著优势。
一种可以稳定重复用于阿洛酮糖转化合成地衣芽孢杆菌细胞

[发明专利]一种耐热的磁性壳聚糖固定化酶的制备-CN202310065215.0在审
发明人： 李由然;石贵阳;聂铭甫;张梁;丁重阳;徐沙;顾正华;陈磊 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-01-16 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12N11/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种耐热的磁性壳聚糖固定化酶的制备，涉及固定化酶的技术领域。该固定化酶载体以壳聚糖和海藻酸钠为原料，利用碱性溶液冷冻条件下的溶解及氢键重排的方法，制备出力学性质优良且耐高温的壳聚糖复合水凝胶，进一步采用化学交联法制备固定化耐高温酶。基于此，本研究建立的固定化酶制备方法，有助于解决工业酶高温情况下易失活，且难以连续使用的问题。
一种耐热磁性聚糖固定制备

[发明专利]一种热稳定性提高的蔗糖合酶突变体-CN202211333535.1在审
发明人：丁重阳;赵丽婷;马忠宝;陈磊;徐萌萌;王琼;顾正华;李由然;徐沙;石贵阳 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-10-28 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： C12N9/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种热稳定性提高的蔗糖合酶突变体，属于酶工程领域。本发明提供热稳定性提高的蔗糖合酶突变体，能够在高温下实现UDP‑Glc的合成，从而提高其生产效率，满足工业化生产的需求。
一种热稳定性提高蔗糖突变体

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