本发明公开了一种检测海洋致病弧菌的基因芯片及其制备方法与检测方法,所述基因芯片包括固相载体及固定在固相载体上的检测探针,所述检测探针包括创伤弧菌gyrB基因探针、创伤弧菌毒力基因hemA探针、灿烂弧菌gyrB基因探针、灿烂弧菌毒力基因toxR探针、哈维式弧菌gyrB基因探针、哈维氏弧菌毒力基因hemA探针、副溶血弧菌gyrB基因探针、副溶血弧菌毒力基因toxS探针、鳗弧菌gyrB基因探针和鳗弧菌毒力基因hem探针,其分别由SEQ ID NO 1‑10的序列所示。本发明首次将基因芯片用于海洋致病弧菌种间的检测。本发明的基因芯片不仅能够快速、灵敏地检测靶细菌感染,而且重复性好,信号强,不易出现非特异信号。
本发明公开了检测10种海域致病菌的基因芯片,包括固相载片,固相载片上设有质控探针和检测探针,检测探针的核苷酸序列组份为SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.27所示,可以同时检测出阴沟肠杆菌、迟缓爱德华菌、粪链球菌、强壮弧菌、哈维氏弧菌、副溶血弧菌、灿烂弧菌、创伤弧菌、鳗弧菌和黄海希瓦氏菌,而且不需要活的细菌,只要有DNA即可;具有高通量、平行性、微型化、自动化、快速灵敏、定量、样品用量少等显著优点。
本发明公开了菲律宾蛤仔大防御素及其制备方法和应用,包括从感染病菌的菲律宾蛤仔提取总RNA、mRNA纯化、cDNA模板溶液制备、大防御素基因筛选、基因克隆、重组质粒构建、重组基因表达和重组蛋白纯化步骤得到该大防御素,该大防御素的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示;该大防御素属于一类新颖的大防御素,对海洋来源的多种革兰氏阳性和阴性病原微生物均具有很强的抑制活性,具有开发为广谱抗菌类药物、遗传选育和饲料添加剂等方面的应用价值;该菲律宾蛤仔大防御素的制备方法,通过总RNA提取、mRNA纯化、cDNA模板溶液制备、大防御素基因筛选、基因克隆、重组质粒构建、重组基因表达和重组蛋白纯化步骤,能得到纯度较高的重组的菲律宾蛤仔大防御素。