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[发明专利]一种通过遗传改造提高裂殖壶藻ATCC20888油脂和DHA含量的方法-CN201811423642.7有效
发明人：张卫文;王方忠;陈磊;刘璐 -专利权人： 昆明藻能生物科技有限公司
申请日： 2018-11-27 - 公布日： 2022-06-07 - 主分类号： C12N15/80 文献下载
摘要：本发明公开一种通过遗传改造获得高油脂和DHA含量的裂殖壶藻ATCC20888突变藻种的方法。包含如下步骤：（1）过表达来源于隐甲藻的苹果酸酶提高裂殖壶藻ATCC20888还原力，获得高产油脂的突变藻种；（2）以上一步获得的藻种为出发藻种，过表达来源于高山被孢霉菌的延长酶，将十六碳转化为十八碳，解除对乙酰辅酶A羧化酶的抑制作用，提高前体供给，进一步提高油脂含量的同时，提高DHA占细胞干重的比例。利用本发明的方法对裂殖壶藻藻种进行遗传改造，获得的裂殖壶藻突变藻种与出发藻种相比，油脂占细胞干重比例提高48.63%，其含量达到藻体干重的71.68%；DHA占细胞干重比例提高38.69%，其含量达到藻体干重的26.70%。
一种通过遗传改造提高裂殖壶藻 atcc20888 油脂 dha 含量方法

[发明专利]一种多因素协同进化提高隐甲藻DHA产量的方法-CN201810578115.7有效
发明人：张卫文;陈磊;刘璐;刁进进 -专利权人： 昆明藻能生物科技有限公司
申请日： 2018-06-07 - 公布日： 2021-09-28 - 主分类号： C12N1/36 文献下载
摘要：本发明公布了一种多因素协同进化获得高产二十二碳六烯酸隐甲藻ATCC30556突变菌株的方法。其特征是包含如下步骤：(1)隐甲藻细胞对烯禾啶和芝麻酚的敏感浓度的确定；(2)以烯禾啶作为选择压力对隐甲藻进行驯化获得高产油脂的突变菌株；(3)以上一步获得的菌株为出发菌株，以芝麻酚作为选择压力进行第二次驯化获得对芝麻酚不敏感的突变菌株；(4)在不敏感菌株中添加芝麻酚促进隐甲藻生物量的积累。利用本发明的方法对隐甲藻细胞进行定向驯化，能获得异样培养条件下对芝麻酚不敏感的菌株，通过体外添加芝麻酚可以进一步提高DHA的产率。通过本发明获得的突变菌株，在培养过程中添加1mM芝麻酚可以将DHA的产率大幅度提高130％。
一种因素协同进化提高隐甲藻 dha 产量方法

[发明专利]一种高生长能力隐甲藻突变藻株的选育方法-CN201611197176.6有效
发明人：张卫文;陈磊;刘璐;刘晶 -专利权人： 昆明藻能生物科技有限公司
申请日： 2016-12-22 - 公布日： 2021-06-15 - 主分类号： C12N13/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于脂肪酸合成关键酶乙酰辅酶A羧化酶的抑制剂(包括但不限于稀禾定)作为选择压力的隐甲藻突变藻株选育方法，包括隐甲藻藻株常压室温等离子体(ARTP)诱变和在乙酰辅酶A羧化酶的抑制剂(包括但不限于稀禾定)的选择压力下的突变藻株筛选方法，以及在乙酰辅酶A羧化酶的抑制剂(包括但不限于稀禾定)的选择压力下的隐甲藻藻株的驯化方法。本发明的特征是将常压室温等离子体诱变技术和基于乙酰辅酶A羧化酶的抑制剂(包括但不限于稀禾定)的藻株筛选方法结合，以及基于乙酰辅酶A羧化酶的抑制剂(包括但不限于稀禾定)的藻株驯化方法，相对于已有的隐甲藻藻株选育方法，具有能够高效、快速获得高生长能力藻株的特点。
一种生长能力隐甲藻突变选育方法

[发明专利]采用De novo转录组分析鉴定隐甲藻中与DHA生物合成相关的脂肪酸去饱和酶基因的方法-CN201710105914.8有效
发明人：张卫文;陈磊;裴广胜;刘璐 -专利权人： 昆明藻能生物科技有限公司
申请日： 2017-02-24 - 公布日： 2020-10-30 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明公开了一种通过De novo转录组测序，转录本拼接和差异表达分析，鉴定蔻氏隐甲藻中与二十二碳六烯酸(DHA)生物合成相关脂肪酸去饱和酶基因的方法。具体步骤包括：(1)对隐甲藻进行DHA发酵培养；(2)收集不同生长和DHA积累阶段的菌体并进行RNA提取与转录组Illumina深度测序；(3)测序数据的分析与预处理；(4)对拼接后的转录组进行功能注释与相关性统计分析，鉴定发现隐甲藻中与DHA生物合成相关的脂肪酸去饱和酶，并获得其基因全长序列；(5)通过qRT‑PCR分析技术，对隐甲藻中与DHA生物合成相关的脂肪酸去饱和酶的基因进行表达验证。发明为研究隐甲藻DHA的生物合成机制以及提高隐甲藻中DHA合能力成提供重要的方法和知识基础。
采用 de novo 转录组分鉴定隐甲藻中 dha 生物合成相关脂肪酸饱和基因方法

[发明专利]一种提高寇氏隐甲藻DHA产率和得率的方法-CN201910951387.1在审
发明人：张卫文;吕明明;王方忠;陈磊 -专利权人： 昆明藻能生物科技有限公司
申请日： 2019-10-08 - 公布日： 2019-12-31 - 主分类号： C12N13/00 文献下载
摘要：本发明公布了一种通过ARTP诱变获得高DHA产率和得率的寇氏隐甲藻ATCC30556突变藻种的方法。其特征是包含如下步骤：(1)对寇氏隐甲藻ATCC30556进行ARTP诱变，获得诱变藻种后，利用淀粉能够和碘相结合呈现紫色的原理，对转化子进行通量筛选，挑选平板上与出发株相比，菌落直径较大并且菌体呈现淡紫色的菌落；(2)利用摇瓶发酵，复筛上述(1)中获得的候选诱变藻种，获得生长速率、油脂和DHA产率都显著性提高，同时淀粉含量显著降低的藻种；(3)对(2)中获得的诱变藻种利用5‑L发酵罐进行表型进一步确认，确定其DHA产率及得率。利用本发明的方法获得的寇氏隐甲藻突变藻种与出发藻种相比，DHA产率和得率分别提高到原来的1.69倍和1.28倍，达到57.7mg/L/h和51.96mg/g，相比于其他的育种方法，本发明获得的DHA产率和得率是目前报道的最高值，在DHA产业化领域具有重要的应用前景。
藻种产率诱变得率寇氏隐甲藻菌落淀粉突变摇瓶发酵产业化淡紫色发酵罐显著性转化子表型复筛菌体通量紫色育种筛选生长应用

[实用新型]一种提高生物反应器供气效率的装置-CN201920085801.0有效
发明人：代兴举;张卫文;陈磊;刘璐 -专利权人： 昆明藻能生物科技有限公司
申请日： 2019-01-18 - 公布日： 2019-10-22 - 主分类号： C12M1/00 文献下载
摘要：本实用新型技术属于生物反应器装置技术领域，涉及一种提高生物反应器供气效率的装置，包括供气管，该供气管一端连接供气主管，供气管相对应的另一端连接空气分配器，所述空气分配器设置在所述生物反应器的内底部，该空气分配器由分配器储气室和覆盖在其上表面的弧形面板组成，该弧形面板采用微孔排气，其上分布有若干微孔。该装置使空气更均匀地分布到溶液中，从而增加溶液中菌体与氧气的接触面积，在不需要提高搅拌转速的前提下提升了溶氧值，提高了空气使用效率。
空气分配器生物反应器供气管弧形面板一端连接供气生物反应器装置本实用新型供气主管搅拌转速使用效率微孔排气储气室分配器上表面菌体溶氧微孔氧气覆盖

[发明专利]一种高生长速率的隐甲藻突变株的构建方法-CN201610076812.3有效
发明人：刘璐;刁进进;陈磊;张卫文 -专利权人： 昆明藻能生物科技有限公司
申请日： 2016-02-03 - 公布日： 2019-10-18 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明公开一种高生长速率的隐甲藻突变株的构建方法，具有高生长速率的微藻隐甲藻ATCC 30556基因删除突变株的方法。其特征是包含如下步骤：(1)隐甲藻光合作用相关基因核酮糖1，5‑二磷酸羧化酶/加氧酶Rubisco基因的克隆；(2)用于同源双交换整合的基因片段的构建；(3)Rubisco基因的删除和突变株的构建；(4)隐甲藻Rubisco基因删除突变体生长特性的比较分析。利用本发明的方法定点敲除隐甲藻的Rubisco基因，能够获得异养培养条件下具有高生长速率的隐甲藻突变株，为二十二碳六烯酸(DHA)高效发酵菌种的优化筛选提供了一种新方法。
一种生长速率隐甲藻突变构建方法

[发明专利]一种对生产二十二碳六烯酸隐甲藻进行基因转化的方法-CN201510186910.8有效
发明人：刘璐;刁进进;陈磊;张卫文 -专利权人： 昆明藻能生物科技有限公司
申请日： 2015-04-20 - 公布日： 2019-08-23 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明公开了一种生产二十二碳六烯酸隐甲藻敏感的抗生素潮霉素B，以及利用潮霉素B做为抗性筛选标记，对隐甲藻进行基因转化的方法；该方法包括下述步骤：（1）隐甲藻敏感抗生素潮霉素B作用浓度的确定；（2）基因转化系统的建立；（3）外源基因片段的准备；（4）外源基因片段对隐甲藻的转化。利用本发明可以将外源基因导入隐甲藻细胞中，同时使用潮霉素B作为筛选标记，得到外源基因转化入隐甲藻后的工程菌株。该方法为开展隐甲藻的基因工程改造提供了重要的技术基础。
一种生产十二碳六烯酸隐甲藻进行基因转化方法

[发明专利]一种富含DHA、虾青素和辅酶Q10的功能性禽蛋生产方法-CN201810578108.7在审
发明人：张卫文;陈磊;刘璐 -专利权人： 昆明藻能生物科技有限公司
申请日： 2018-06-07 - 公布日： 2019-01-04 - 主分类号： A23K50/75 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，涉及家禽养殖。具体是一种同时富含DHA、虾青素和辅酶Q10三种重要营养物质的功能性禽蛋生产方法。本发明的特征是，将富含DHA、虾青素以及辅酶Q10的禽蛋饲料直接饲喂产蛋家禽1‑2周，其中向饲料中添加的营养物包含三种成分，分别为以下三组成分中的每一组中的任一种，第一组：鱼粉、亚麻籽、裂殖壶藻粉、裂殖壶藻泥、DHA鱼油、DHA藻油；第二组：红球藻藻粉、红球藻藻泥、红球藻藻油、化学合成的虾青素；第三组：辅酶Q10。其中第一组中富含DHA的添加营养物的量为喂养饲料总质量的0.1～5.0％；同时第二种富含虾青素的添加营养物的量为喂养饲料总质量的0.1～5.0％；第三组辅酶Q10的添加量为喂养饲料总质量的0.0001～0.001％。
虾青素辅酶富含饲料红球藻喂养添加营养物禽蛋生产藻粉藻泥生物技术领域重要营养物质产蛋家禽化学合成家禽养殖添加量亚麻籽营养物鱼粉禽蛋饲喂藻油

[发明专利]一种具有视力保护及增强功效的营养鸡蛋的制备方法-CN201810639292.1在审
发明人：张卫文;陈磊;刘璐 -专利权人： 昆明藻能生物科技有限公司
申请日： 2018-06-20 - 公布日： 2018-11-16 - 主分类号： A01K67/02 文献下载
摘要：本发明是一种具有视力保护及增强功效的营养鸡蛋的制备方法。步骤是：挑选产蛋期的健康的蛋鸡若干只；在上述蛋鸡日常饲料中，同时添加以下三组成分中的每一组中的任一种，第一组：叶黄素、万寿菊、其它富含叶黄素的常见植物；叶黄素质量或万寿菊或其它富含叶黄素的植物中所含叶黄素的质量占喂养饲料总质量的比例为0.0005％～0.01％；第二组：玉米黄质、玉米、其他富含玉米黄质的常见植物；玉米黄质质量或玉米或其它富含玉米黄质的植物中所含玉米黄质的质量占喂养饲料总质量的比例为0.0003％～0.012％；第三组：鱼粉、亚麻籽、裂殖壶藻粉、裂殖壶藻泥、DHA鱼油、DHA藻油，其中所含DHA的质量为喂养饲料总质量的0.1～1.0％；连续喂养1‑6周；获得鸡蛋。
叶黄素玉米黄质富含喂养视力保护营养鸡蛋万寿菊饲料制备蛋鸡日常饲料玉米产蛋期亚麻籽鱼粉藻粉藻泥鸡蛋健康

[发明专利]多种化学促进剂提高微生物异养发酵生产二十二碳六烯酸的方法-CN201510055312.7有效
发明人：张卫文;陈磊;刘璐 -专利权人： 昆明藻能生物科技有限公司
申请日： 2015-02-03 - 公布日： 2018-04-06 - 主分类号： C12P7/64 文献下载
摘要：本发明多种化学促进剂提高异养微生物发酵生产二十二碳六烯酸（DHA）的方法，以寇氏隐甲藻的异养培养基为基础，在其中添加任一种化学促进剂；所说异养培养基的组成为葡萄糖9 g/L,酵母浸粉2 g/L,海盐25 g/L；所说化学促进剂也可称为植物生长调节剂，包括吲哚乙酸（IAA）、萘氧乙酸（BNOA）、氯苯甲酸、水杨酸（SA）、脱落酸（ABA）、乙醇胺，这些化学促进剂，在所说异养培养基中的浓度为吲哚乙酸（IAA）2.5 mg/L，萘氧乙酸（BNOA）4 mg/L，氯苯甲酸4 mg/L，水杨酸（SA）1 mg/L，脱落酸（ABA）20 mg/L，乙醇胺2.5 mM；25ºC下培养72小时后，提取油脂，使用气质联用仪测定培养物DHA含量，同时从平行培养物中提取细胞代谢物，利用代谢组学方法检测分析胞内代谢物的含量变化情况。
多种化学促进剂提高微生物发酵生产十二碳六烯酸方法

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