本发明属于生物技术领域,涉及一种猪干扰素λ4重组蛋白及其制备方法和应用。猪干扰素λ4(sIFN‑λ4)重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。将sIFN‑λ4片段连接到质粒中获得重组质粒,sIFN‑λ4的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示;将重组质粒转化大肠杆菌,然后进行菌液培养,并加入IPTG诱导,收集包涵体,溶解、纯化得到重组sIFN‑λ4蛋白。重组sIFN‑λ4蛋白能够诱导大肠杆菌、克雷伯肺炎杆菌和沙门氏菌等革兰氏阴性菌凝集从而阻断它们入侵真核细胞,同时还可以在细胞和动物机体水平抑制猪流行性腹泻病毒的感染。这些结果表明sIFN‑λ4具有阻断细菌感染和抗病毒感染的双重特性。