本发明提供了一种编码青霉素G酰化酶的基因及表达的突变后青霉素G酰化酶在制备头孢氨苄中应用,涉及基因工程和酶工程技术领域,所述编码青霉素G酰化酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述编码青霉素G酰化酶的基因表达得到突变后的青霉素G酰化酶;表达所得突变后的青霉素G酰化酶的酶活性高,可进一步促进合成头孢氨苄反应的正向进行,降低表达宿株产物的水解(H)功能,提高产物的合成(S)功能,得到S/H比较高表达宿株,相对于旧的表达宿株S/H提高了5倍,降低了水解副产物的生成量,提高了主产物头孢氨苄的生成量,降低了两个反应物的摩尔比,不仅提高了产品质量还降低了企业成本。
本发明公开了一种头孢菌素C酰化酶,其氨基酸序列为SEQ ID NO:4。相比假单胞菌GK16(Pseudomonas sp.GK16)来源的野生型GL‑7‑ACA酰化酶SEQ ID NO:1,酶活力提高了52倍,可用于一步酶法生产7‑氨基头孢烷酸(7‑ACA),当纯酶催化头孢菌素C反应时,产物生成率超过97%。