本发明涉及一种人源OAT1‑MRP2‑UGT2B7三重稳定转染细胞株的构建方法及功能验证:将hOAT1的目的基因与pcDNA3.1/Hygro(+)表达载体组装,hMRP2的目的基因与pcDNA3.1/G418(+)表达载体组装,hUGT2B7的目的基因与pcDNA3.1/Puromycin(+)表达载体组装,构建pcDNA3.1/Hygro(+)‑hOAT1质粒、pcDNA3.1/G418(+)‑hMRP2质粒和pcDNA3.1/Puromycin(+)‑hUGT2B7质粒;其中,hOAT1、hMRP2和hUGT2B7目的基因的核苷酸序列分别如SEQ ID No.1‑3所示;采用脂质体法将构建的三种质粒依次转染至MDCKII细胞、Caco2细胞或HEK293细胞,分别使用特异抗生素筛选出阳性克隆,并通过使用阳性化合物进行转运或代谢功能验证,确认细胞株同时稳定表达OAT1、MRP2和UGT2B7基因及其蛋白。本发明的三重稳定转染细胞株可用于模拟肝内OAT1介导的摄取、MRP2介导的外排及UGT2B7介导的二相代谢功能,是评价药物处置机制的重要体外研究手段。