本发明公开了一种用于定量检测土壤中小麦茎基腐病原菌的引物及检测方法,属于植物病害检测技术领域。所述的引物基于小麦茎基腐病原菌的RNA聚合酶第二大亚基RPB2设计;所述的引物为如下所示,上游引物:SEQ ID No:1;下游引物:SEQ ID No:2。用于定量检测土壤中小麦茎基腐病原菌的检测方法,包括以下步骤:(1)提取样品中的DNA;(2)以步骤(1)提取的DNA作为待检测DNA模板,采用权利要求1所述的引物进行普通PCR扩增反应或实时荧光定量PCR扩增反应;(3)分析普通PCR扩增产物或实时荧光定量PCR扩增产物。本发明设计的引物及检测方法,表现出特异性强、扩增效率高、灵敏度高、重现性高、实用性好的特点,为小麦茎基腐病原菌的诊断、病害防治和农药减量使用提供新方法,极大提升了土壤中小麦茎基腐病原菌的检测效率。