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[发明专利]一种提升外泌体稳定性的方法及外泌体保存液-CN202311175966.4在审
发明人：葛啸虎;陆路;韩春乐;王淼;王娜 -专利权人： 天津外泌体科技有限公司
申请日： 2023-09-13 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明公开一种提升外泌体稳定性的方法及外泌体保存液，外泌体保存液由果胶和/或海藻酸钠与磷酸盐缓冲液混合得到，使用时，先将外泌体保存液加热制成胶体溶液，再加入新鲜外泌体，封存后可在常温条件下长期保存外泌体，保护液能够提高外泌体体系带电量，避免外泌体在粒径、浓度和活性上的变化，保护外泌体的完整性，稳定性，使得外泌体能够长期保持其生物活性，并保持其内含物的稳定性。
一种提升外泌体稳定性方法保存

[发明专利]牛奶外泌体装载烷基化美容肽及在化妆品中的应用-CN202311047717.7在审
发明人：葛啸虎;董凤伟;陆路;王淼;柏玮;祁冬丽;黄德亿;韩春乐 -专利权人： 天津外泌体科技有限公司
申请日： 2023-08-21 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： A61K8/64 文献下载
摘要：本发明提供了牛奶外泌体装载烷基化美容肽及在化妆品中的应用，本发明提供了一种装载有烷基化美容肽的牛奶外泌体制剂，包括烷基化美容肽和牛奶外泌体，所述烷基化美容肽的烷烃链插入到牛奶外泌体的磷脂双分子层膜中，所述烷基化美容肽在牛奶外泌体制剂中的包封率大于25%。所述烷基化美容肽装载到牛奶外泌体过程中pH满足以下条件：①所述牛奶外泌体制剂在电镜下能观察到完整清晰的外泌体，HPLC测得的纯度在55%以上，并且②所述烷基化美容肽的饱和浓度≥10μg/mL。装载烷基化美容肽后的牛奶外泌体应用在化妆品中，利用牛奶外泌体增强美容肽的透皮效果，其功效要超过牛奶外泌体与美容肽单独使用的功效加合。
牛奶外泌体装载烷基化美容化妆品中的应用

[发明专利]一种提高脐带间充质干细胞外泌体表达量的方法-CN202310651210.6有效
发明人：葛啸虎;董凤伟;陆路;王淼;杜焕青 -专利权人： 天津外泌体科技有限公司
申请日： 2023-06-05 - 公布日： 2023-09-08 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开一种提高脐带间充质干细胞外泌体表达量的方法，将人脐带间充质干细胞接种于可变溶氧条件的3D生物反应器中，溶氧条件为常氧转低氧培养，常氧条件氧分压控制为50%，低氧条件氧分压控制为15%。本发明的有益效果是：在3D生物反应器内常氧转低氧条件下培养的脐带间充质干细胞外泌体表达量较常氧、低氧及低氧转常氧条件明显提高；适于批量生产，易于推动脐带来源间充质干细胞外泌体生物产品的工业化生产。
一种提高脐带间充质干细胞体表方法

[发明专利]一步法叠氮化修饰细胞外囊泡的方法及修饰试剂-CN202210432738.X有效
发明人：葛啸虎;王达;白云飞;王淼;董凤伟;陈巍;陆路;程国刚;肖更午;马德美 -专利权人： 天津外泌体科技有限公司
申请日： 2022-04-24 - 公布日： 2023-08-04 - 主分类号： A61K49/00 文献下载
摘要：本发明公开一种一步法叠氮化修饰细胞外囊泡的方法及修饰试剂，在Lewis碱催化剂的催化条件下，叠氮化物将细胞外囊泡表面醇羟基取代为叠氮基，一步制备得到叠氮化修饰细胞外囊泡；修饰过程在不影响细胞外囊泡的形态学、膜结构及生物学功能。制备得到的叠氮化修饰的细胞外囊泡能够用于细胞外囊泡活体示踪，与炔化修饰的荧光探针在铜离子催化条件下进行点击化学偶联，完成对细胞外囊泡的荧光标记，荧光标记后的细胞外囊泡取得了良好的示踪效果，荧光标记率较高，稳定性高。
一步法氮化修饰细胞外囊泡方法试剂

[发明专利]外泌体冻干保护剂和外泌体冻干制剂的制备方法-CN202310273628.8有效
发明人：葛啸虎;陆路;王淼;高梦雅 -专利权人： 天津外泌体科技有限公司
申请日： 2023-03-21 - 公布日： 2023-07-14 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明提供了一种外泌体冻干保护剂和外泌体冻干制剂的制备方法，涉及冻干技术领域。该外泌体冻干保护剂以10~50 mmol/L的Tris缓冲液为缓冲体系；按照各物质在所述缓冲体系中的工作浓度计，还包括糖类物质1~5%w/v、醇类物质1~5%w/v、明胶水解物0.1~0.5%w/v和精氨酸50~500 mmol/L。该外泌体冻干保护剂和外泌体冻干制剂的制备方法缓解了现有技术中存在的冻干保护剂无法有效的维持外泌体冻干后生物活性的技术问题。
外泌体冻干保护制剂制备方法

[发明专利]一种基于二维液相评价外泌体纯度的方法-CN202211471282.4有效
发明人：葛啸虎;韩春乐;陆路;何磊;王淼;王娜;高梦雅;孟晓竹;温智钧 -专利权人： 天津外泌体科技有限公司
申请日： 2022-11-23 - 公布日： 2023-06-30 - 主分类号： G01N30/02 文献下载
摘要：本发明公开一种基于二维液相评价外泌体纯度的方法，通过二维液相色谱仪采用尺寸排阻法和离子交换色谱法结合的方法来评价外泌体纯度；样品首先进入液相色谱仪第一维的尺寸排阻色谱柱，采用第一维液相的流动相等度洗脱，使外泌体进行首次分析；再通过切换液相色谱仪的六通阀，对外泌体主峰部分进行中心切割进入第二维的离子色谱柱对其进行捕捉收集，通过第二维的流动相梯度洗脱进入检测器进行第二次分析。本纯度评价方法操作简单，自动化水平高，占用时间短，准确度高，适合大批样品同时检测，尤其适合未来外泌体大规模工业化生产的纯度评价工作，高效且过程可控。
一种基于二维评价外泌体纯度方法

[发明专利]多谱系肝类器官模型及基于该模型的药物肝毒评价方法-CN202211314796.9有效
发明人：吴迪;葛啸虎;王莉莉;李慧芳;徐迎;罗晓琴;曹宁 -专利权人： 天津外泌体科技有限公司
申请日： 2022-10-26 - 公布日： 2023-02-03 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供了一种多谱系肝类器官模型及基于该模型的药物肝毒评价方法，该模型使用添加有GDF8、NOG、FGF4、前期分化组合物、后期分化组合物和EGM‑2的培养基对hPSC培养，最终获得多谱系肝类器官模型；该评价方法包括质量检定步骤以及药物性肝毒评价步骤。基于该类器官的肝毒评价方法比原代肝细胞灵敏度更高，可有效检出AST、ALT等肝损指标，准确区分结构类似物的肝脏毒性，识别譬如胆汁淤积毒性、线粒体毒性等传统体内/外模型难以辨认的特异质肝毒。应用此新型药物肝毒评价方法，将填补当下2D/3D细胞模型与动物模型之间的沟壑，有助于降低药物的未知肝毒风险，提高药物开发成功率。
谱系器官模型基于药物评价方法

[发明专利]肝脏双表型细胞的成熟方法-CN202210119890.2有效
发明人：吴迪;徐迎;曹宁;王莉莉;王思思;李慧芳;罗晓琴 -专利权人： 天津外泌体科技有限公司
申请日： 2022-02-09 - 公布日： 2022-09-13 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供了一种肝脏双表型细胞的成熟方法，以人多能干细胞体外诱导分化产生的肝脏双表型细胞构成的3D类器官为起点，以“3D‑2D‑3D”的培养顺序，并配合不同阶段对应的促成熟组合物，共同实现了双表型细胞的体外成熟。并且，消化为单细胞的3D类器官和2D肝前体细胞可批量冻存，经复苏后可进一步成熟，可实现产业化。
肝脏表型细胞成熟方法

[发明专利]高纯度胰腺祖细胞的产生方法-CN202210541011.5有效
发明人：葛啸虎;吴迪;王思思;罗晓琴;李慧芳 -专利权人： 天津外泌体科技有限公司
申请日： 2022-05-17 - 公布日： 2022-09-13 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供了一种高纯度胰腺祖细胞的产生方法，该方法关键在于通过高密度接种hPSCs准备分化板，使细胞的生长始终处于一种高度挤压的状态；同时采用Matrigel作为细胞外基质，并限定稀释倍数，使得胶的硬度在合适范围内；另外，采用梯度降低ActA浓度的方式高效产生定型内胚层。以上三个关键步骤的组合对于本方案成功实施缺一不可，在同时满足以上关键步骤的前提下产生的胰腺祖细胞，PDX1+NKX6.1+双阳性细胞效率稳定在90%以上。该方法不仅诱导效率高，且不同批次间稳定性好，不同hPSC间兼容性高；而且分化耗时短、成本低、操作简单。
纯度胰腺细胞产生方法

[发明专利]一种细胞外囊泡体外装载mRNA的方法-CN202210329162.4有效
发明人：葛啸虎;陆路;张权;柴天聪;田应洲;王达;尹建新;王淼;韩春乐 -专利权人： 天津外泌体科技有限公司
申请日： 2022-03-31 - 公布日： 2022-07-26 - 主分类号： A61K9/50 文献下载
摘要：本发明公开一种细胞外囊泡体外装载mRNA的方法，在中性条件下携带弱负电或电中性脂质体，在弱酸性条件下进行mRNA装载，将mRNA与阳离子脂质体共孵育后装载细胞外囊泡，装载后的细胞外囊泡通过超滤换液恢复到中性；抽提样品中的RNA，通过RT‑qPCR定量检测mRNA拷贝数，检测装载前后mRNA拷贝数，比值为mRNA在细胞外囊泡中的包封率。与传统方法比较，本发明提供的方法操作简单，对操作技术水平要求低、实验周期短；对于所要转载的mRNA限制少，相应的具有较广的应用范围；在中性条件下携带弱负电或电中性脂质，在弱酸性条件下进行mRNA装载，装载后的细胞外囊泡通过换液的方法恢复到中性环境，可以规避阳离子脂质体携带正电荷而存在细胞毒性的问题，能够用于制备生物制品。
一种细胞外囊泡体外装载 mrna 方法

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