本发明公开了一种优化的马克斯克鲁维酵母启动子，其至少包括：a)如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；或b)如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；或c)如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列。还公开了一种优化的马克斯克鲁维酵母分泌信号肽，其至少包括如SEQ ID No.4所示的核苷酸序列，以及一种优化的组合体，其至少包括如SEQ ID No.6所示的核苷酸序列。本发明还公开了含有上述马克斯克鲁维酵母启动子和/或分泌信号肽的重组表达载体、基因工程菌及其制备方法与应用。本技术方案可显著提升马克斯克鲁维酵母高效重组表达外源蛋白的能力，为推动马克斯克鲁维酵母表达系统在工业蛋白制造领域的应用奠定了基础。
本发明公开了一种马克斯克鲁维酵母启动子，其包含菊粉酶基因起始密码子上游1136bp的序列，去除了N端的poly‑A序列，并且包含潜在的Zn(II)2Cys6转录因子的结合位点。该启动子至少包括以下核苷酸序列：1)如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列；或2)如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个核苷酸，具有菊粉酶基因启动子活性的衍生核苷酸序列。本发明还公开了含有该启动子的重组表达载体、含有该启动子或重组表达载体的基因工程菌及其应用与制备方法。利用本发明构建的重组载体可以获得阿魏酸酯酶外源蛋白的表达，其表达的活性超过了目前已报道的其他长度的菊粉酶基因启动子。
本发明提供了一种阿魏酸酯酶基因，其来源于中国牦牛瘤胃微生物，具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，编码如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。本发明还提供了含有该基因的马克斯克鲁维酵母重组表达载体及基因工程菌株，并提供了制备阿魏酸酯酶的方法和制得的阿魏酸酯酶的用途。将阿魏酸酯酶在马克斯克鲁维酵母表达系统中重组表达，经高密度发酵48小时后胞内和胞外的阿魏酸酯酶的活力分别为686.35U/mL和346.34U/mL。马克斯克鲁维酵母重组表达的阿魏酸酯酶可释放玉米麸皮中的阿魏酸。利用本发明获得的阿魏酸酯酶，可用于食品加工、饲料添加、生物医药、纤维素物质生物转化、生物能源等领域。
