本发明公开了一种检测人乳头瘤病毒‑16的引物组和试剂盒及其qPCR检测方法,所述引物组包括如SEQ ID NO:1所示的正向引物;如SEQ ID NO:2所示的反向引物。本发明的检测人乳头瘤病毒‑16的引物组可用于HPV16病毒DNA在HPV16感染者中的定量分析,或者对有疑似HPV16感染症状的免疫缺陷患者进行精确诊断。同时,本发明的检测人乳头瘤病毒‑16的qPCR检测方法能够快速并准确检测多种样本中高危型HPV16病毒,可以用于宫颈癌、口咽癌、肛殖癌的细胞刷样本和FFPE样本检测,通过准确检测出样本中病毒拷贝数为HPV16病毒感染的临床诊断提供有价值的信息。本发明也适用于检测动物血液和组织细胞标本是否感染HPV16,对生物药物在动物模型上的安全性研究具有重要作用。