本发明公开了一种基于CRSIPR技术构建14‑3‑3ε基因敲除细胞株的方法及其应用，属于生物技术领域。本发明提供一种敲除14‑3‑3ε基因的sgRNA序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明利用CRISPR‑Cas9技术首次在鸡成纤维细胞系DF‑1细胞基因组上敲除14‑3‑3ε基因，使得14‑3‑3ε蛋白的表达完全丧失，获得14‑3‑3ε敲除的DF‑1细胞株，且敲除细胞株活性、生长速度等方面均与对照细胞无明显差异，是较为理想的DF‑1敲除的细胞模型；操作简便，周期短，成本低，改造后细胞株稳定，可用于研究14‑3‑3ε蛋白的生物学功能。
本发明公开了一种FNR突变体及其在基因表达调控中的应用。所述突变体为在所述FNR的氨基酸序列上具有R169G和/或G216D突变，所述FNR的氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示，或与如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有99％同一性。本发明的FNR突变体FNR(R169G)和FNR(G216D)可以实现对PfnrS启动子更为严格的调控，解决了该启动子有氧条件下的泄露表达造成的问题，提高了菌株生长和表达的稳定性。
