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[发明专利]基于新型等温扩增的核酸超灵敏检测方法及应用-CN202310580980.6在审
发明人：万家余;卜胜君;周虹羽;孙赫;孟鹤媛 -专利权人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所
申请日： 2023-05-23 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： C12Q1/6844 文献下载
摘要：基于新型等温扩增的核酸超灵敏检测方法及应用，属于生物检测技术领域，本发明采用探针B的模板和探针A的引物使循环引物延伸，仅使用一个引物进行等温扩增，具有较高的扩增效率，并使用37℃作为恒温；相对设计的模板形成了HP，它只能通过与靶核酸的特异性结合来打开；TPIA系统允许以等温方式对miRNA进行便携式和超灵敏的检测；通过自由改变互补靶标配对片段核酸序列，该策略可以被探索为在等温条件下检测其他核酸靶标的通用用户友好平台；通过重新设计模板以在等温条件下靶向感兴趣的分子，本发明可用于进一步扩增和高效可靠地检测其他生物分子，如小分子和蛋白质。
基于新型等温扩增核酸灵敏检测方法应用

[发明专利]基于催化发夹组装和λ-外切酶裂解反应的荧光生物传感器-CN202310476137.3在审
发明人：万家余;韩金城;卜胜君;郝镯;李楠;周虹羽 -专利权人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所
申请日： 2023-04-27 - 公布日： 2023-08-08 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明提供一种基于催化发夹组装和λ‑外切酶裂解反应的荧光生物传感器，属于生物检测技术领域，包括三个发夹结构，分别为发夹H0、发夹H1以及发夹H2，用于快速而敏感地检测致病菌大肠杆菌O157:H7(E.coliO157:H7)。在很宽的浓度范围内(101‑108CFU/mL)检测目标大肠杆菌O157:H7，检测极限为10CFU/mL。通过合理地重新设计发夹H0，该策略的实际诊断能力也被成功地证明用于检测其他目标致病菌。该生物传感器具有成本效益高、速度快、易操作、易携带、灵敏度高的特点，无需复杂的仪器。它特别适合在资源有限的地区应用。
基于催化发夹组装外切裂解反应荧光生物传感器

[发明专利]以乙醛脱氢酶作为信号转导系统检测食源性病原菌的生物传感器及其制备方法和应用-CN202010375386.X有效
发明人：万家余;张文广;李泽鸿;卜胜君 -专利权人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所
申请日： 2020-05-07 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： G01N33/569 文献下载
摘要：以乙醛脱氢酶作为信号转导系统检测食源性病原菌的生物传感器及其制备方法和应用，涉及食源性病原菌检测领域，本发明包括：将Fe3O4和Aptamer加入PBS缓冲液中；加入氯化钙溶液；吸附黑色产物洗涤除上清即得Fe3O4@Aptamer磷酸钙纳米复合物；将KCl和β‑巯基乙醇加入PBS缓冲液中；再加入乙醛脱氢酶和Aptamer；加入氯化钙溶液；白色沉淀物洗涤除上清，即得ALDH@Aptamer磷酸钙纳米复合物；将待测样品加入PBS缓冲液中，加入上述复合物形成三明治夹心免疫复合物；加入反应底物；测量上清pH；计算pH变化量对应的食源性病原菌的浓度。本发明检测时间短、成本低、灵敏性高、特异性强。
乙醛脱氢酶作为信号转导系统检测性病生物传感器及其制备方法应用

[发明专利]一种DNA纳米结构、电化学适配体生物传感器体系及其制备方法和应用-CN202010331196.8有效
发明人：万家余;柏华松;韩烨;卜胜君;刘文森 -专利权人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所
申请日： 2020-04-24 - 公布日： 2022-05-17 - 主分类号： G01N27/327 文献下载
摘要：一种DNA纳米结构、电化学适配体生物传感器体系及其制备方法和应用，涉及食源性致病菌检测领域。本发明通过滚环扩增反应合成稳定的DNA纳米结构，通过加载血红素作为电化学信号标签，以放大信号；单链DNA捕获探针通过Au‑S键修饰在Au电极表面；食源性致病菌特异性适配体和捕获探针在Au电极上形成双链DNA结构；适配体优先结合食源性致病菌，导致适配体‑捕获探针双链体解离，并释放捕获探针；游离捕获探针通过互补DNA序列与DNA纳米结构杂交；通过DPV法的电化学信号以定量测定食源性致病菌浓度。本发明简单、快速、易于操作、实验成本低、灵敏、特异性强，具有良好的应用前景。
一种 dna 纳米结构电化学适配体生物传感器体系及其制备方法应用

[发明专利]电化学生物传感组合物、工作液、电化学生物传感器及其应用-CN202111671238.3在审
发明人：万家余;卜胜君;刘文森;李忠义;郝镯 -专利权人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所
申请日： 2021-12-31 - 公布日： 2022-04-29 - 主分类号： G01N27/26 文献下载
摘要：本发明涉及电化学生物传感器领域，具体涉及Cpf1来自毛螺菌科细菌的CRISPR系统，与杂交链反应相结合，开发了一种用于检测病原菌鼠伤寒沙门氏菌的电化学生物传感器。HCR的功能性DNA发夹结构的自主交叉打开产生了由众多单链DNA组成的聚合物的双链DNA线，其中众多的功能性单链DNA启动了CRISPR‑Cas12a的反式切割活性，以不加选择地切割金电极表面所修饰MB的DNA发夹环。该过程将导致电化学标签的电子转移发生变化。HCR的聚合物双链DNA通过鼠伤寒沙门氏菌适体固定在DBs上。建立的方法可以选择性、灵敏地定量样品中的鼠伤寒沙门氏菌，检测限为20CFU/mL。
电化学生物传感组合工作液传感器及其应用

[发明专利]一种Hemin杂化纳米花及其制备方法和应用-CN201810300810.7有效
发明人：万家余;卜胜君;王奎宇;刘文森 -专利权人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所
申请日： 2018-04-04 - 公布日： 2022-04-19 - 主分类号： C12Q1/28 文献下载
摘要：一种Hemin杂化纳米花及其制备方法和应用，属于食源性致病菌快速检测领域，解决了传统检测食源性致病菌传感器存在的成本高、设计复杂的问题。本发明的一种Hemin杂化纳米花的制备方法，包括：取1.5mL离心管，依次加入0.03mg高铁血晶素Hemin、0.06mg刀豆蛋白ConA悬浮于800μL、10mM的磷酸盐缓冲液PBS中，所述磷酸盐缓冲液PBS中含有20μL、120mM的CuSO4，经震荡混匀、常温静置孵育18～24h后，10000rpm离心3～5min，弃上清后加入100μL、0.1mM的磷酸盐缓冲液PBS悬浮，4℃保存备用。本发明操作简单、成本低廉、灵敏度高、特异性好。
一种 hemin 纳米及其制备方法应用

[发明专利]电化学生物传感组合物、工作液、传感器、装置及其应用-CN202111677287.8在审
发明人：万家余;卜胜君;刘文森;李忠义;郝镯 -专利权人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所
申请日： 2021-12-31 - 公布日： 2022-04-12 - 主分类号： G01N27/26 文献下载
摘要：本发明涉及电化学生物传感器领域，特别涉及电化学生物传感组合物、工作液、传感器、装置及其应用。本发明将CRISPR/Cas12a结合点击化学驱动的指数放大反应(EXPAR)引入到电化学生物传感器中检测miRNA‑21。当存在miRNA‑21时，可在电化学生物传感器中引发点击化学‑指数放大反应，产生大量核酸片段，刺激CRISPR‑Cas12a的反式切割能力，对固定在电极表面的发夹DNA进行切割。在最佳条件下，该电化学生物传感器的最低检出限可达1fM。因此，提出的电化学生物传感器可以灵敏和高效地检测miRNAs，并可能成为POC测试和现场分子诊断的潜在分析工具。
电化学生物传感组合工作液传感器装置及其应用

[发明专利]铂-纳米花及其制备方法和应用-CN201910125517.6有效
发明人：万家余;王奎宇;卜胜君 -专利权人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所
申请日： 2019-02-20 - 公布日： 2022-03-01 - 主分类号： G01N33/543 文献下载
摘要：铂‑纳米花及其制备方法和应用，属于食源性致病菌快速检测领域。本发明的一种靶标食源性病菌的检测方法采用具有催化硼烷氨效应的铂‑纳米花(PPN)传感器体系实现，将修饰生物素Biotin的食源性病原菌抗体固定在标记链霉亲和素SA的磁珠上；加入待测样品37℃恒温孵育2h，用0.1～0.5mM磷酸盐缓冲液PBS清洗3次后吸干；加入铂‑纳米花，在靶标食源性病原菌存在时磁珠上的靶标抗体与铂‑纳米花之间形成三明治夹心免疫复合物；加入氢氧化钠充分释放纳米花中的纳米铂，再加入产气底物硼烷氨，激发硼烷氨分解并产生氢气，采用氢气探测仪并读取氢气浓度，利用其读数进行计算实现靶标食源性病菌浓度的测定。本发明操作简单、成本低廉、灵敏度高、特异性好。
纳米及其制备方法应用

[发明专利]一种二茂铁纳米花、电化学适配体生物传感器体系及其制备方法和应用-CN202011253272.4在审
发明人：万家余;卜胜君;刘文森;王泽;刘秀 -专利权人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所
申请日： 2020-11-11 - 公布日： 2021-03-16 - 主分类号： G01N27/327 文献下载
摘要：一种二茂铁纳米花、电化学适配体生物传感器体系及其制备方法和应用，属于食源性致病菌快速检测领域。本发明的二茂铁纳米花包括二茂铁、Magainin I多肽、CuSO4和磷酸盐缓冲液PBS。本发明的电化学适配体生物传感器体系，包括二茂铁纳米花、修饰生物素Biotin的食源性病原菌抗体和标记链霉亲和素SA的磁珠。本发明通过一步法合二茂铁纳米花，操作简便，稳定性及实用性好，抗外界条件能力强。利用该二茂铁纳米花构建的电化学生物传感器体系作为电化学传感器平台，可产生稳定的电化学信号。本发明的检测方法操作简单、成本低廉、检测快速、实用性强、灵敏度高、特异性强。
一种二茂铁纳米电化学适配体生物传感器体系及其制备方法应用

[发明专利]一种亚甲基蓝-纳米花、电化学适配体生物传感器体系及其制备方法和应用-CN202010563012.0在审
发明人：万家余;卜胜君;刘文森 -专利权人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所
申请日： 2020-06-19 - 公布日： 2020-08-14 - 主分类号： G01N27/327 文献下载
摘要：一种亚甲基蓝‑纳米花、电化学适配体生物传感器体系及其制备方法和应用，涉及食源性致病菌快速检测领域。本发明的一种亚甲基蓝‑纳米花，其组成成分为：亚甲基蓝、抗菌肽、CuSO4和磷酸盐缓冲液PBS，制备过程为：取离心管，依次加入亚甲基蓝、抗菌肽悬浮于800～1500μL、10mM的磷酸盐缓冲液PBS中，该磷酸盐缓冲液PBS中含有20μL、120mM的CuSO4，经震荡混匀、常温静置孵育12～24h后，10000rpm离心3～5min，弃上清后加入100μL、0.1mM的磷酸盐缓冲液PBS悬浮，4℃保存备用。本发明简单、快速、易于操作、实验成本低、灵敏、特异性强，具有良好的应用前景。
一种甲基纳米电化学适配体生物传感器体系及其制备方法应用

[发明专利]一种纳米花传感器体系及其制备方法和应用-CN202010221054.6在审
发明人：万家余;卜胜君;刘文森 -专利权人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所
申请日： 2020-03-26 - 公布日： 2020-08-11 - 主分类号： G01N33/569 文献下载
摘要：一种纳米花传感器体系及其制备方法和应用，属于食源性致病菌快速检测领域，该体系包括四氧化三铁‑纳米花和纳米铂颗粒‑纳米花，四氧化三铁‑纳米花的成份为四氧化三铁、靶标抗体、CuSO4和PBS；纳米铂颗粒‑纳米花的成份为纳米铂颗粒、抗菌肽、CuSO4和PBS。检测时，向待测样品中加入四氧化三铁‑纳米花和纳米铂颗粒‑纳米花，30～37℃恒温孵育1.5h进行磁性分离，用磷酸盐缓冲液PBS清洗4次后吸干，再加入过氧化氢，通过温度计作为信号输出平台对靶标食源性病菌进行检测，利用温差计算出待测样品中靶标食源性病菌浓度。本发明操作简单、成本低、实用性强、灵敏度高、特异性好。
一种纳米传感器体系及其制备方法应用

[实用新型]一种用于检测靶标食源性病原菌的装置-CN201821251089.9有效
发明人：万家余;卜胜君;王奎宇 -专利权人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所
申请日： 2018-08-03 - 公布日： 2019-03-01 - 主分类号： G01N33/569 文献下载
摘要：一种用于检测靶标食源性病原菌的装置，属于食源性致病菌快速检测领域，解决了现有针对靶标食源性病原菌进行检测的便携式分析设备存在的成本高且使用寿命有限的问题。本实用新型的一种用于检测靶标食源性病原菌的装置，包括：产气瓶，所述产气瓶内盛装待检液；安装在产气瓶瓶口处的橡胶塞；插入橡胶塞内且通入产气瓶内部的一次性医用针头；与一次性医用针头相连通的一次性医用注射器延长线；注入到一次性医用注射器延长线内部的染料标记物；尺子，用于测量染料标记物在一次性医用注射器延长线内部行走的距离。本实用新型成本低廉、使用寿命长。
一次性食源性病原菌靶标产气医用注射器延长线检测本实用新型使用寿命医用针头橡胶塞便携式分析设备食源性致病菌测量染料快速检测染料标记标记物瓶口处尺子盛装

[发明专利]一种MnO₂杂化纳米花及其制备方法和应用-CN201810878208.1在审
发明人：万家余;卜胜君;王奎宇 -专利权人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所
申请日： 2018-08-03 - 公布日： 2018-11-30 - 主分类号： G01N33/543 文献下载
摘要：一种MnO₂杂化纳米花及其制备方法和应用，属于食源性致病菌快速检测领域，解决了传统食源性病原菌检测存在成本高且设计复杂的问题。本发明的一种MnO₂杂化纳米花，其组成成分为MnO₂、刀豆蛋白Con A、CuSO₄和磷酸盐缓冲液。其制备方法为：取1.5mL离心管，依次加入10～100μL、0.1～0.15mg/mL MnO₂、0.01～0.1mg刀豆蛋白Con A悬浮于800～1500μL、10mM的PBS中，所述PBS中含有20μL、120mM的CuSO₄，经震荡混匀、常温静置孵育12～24h后，10000rpm离心3～5min，弃上清后加入100μL、0.1mM的PBS悬浮，4℃保存备用。本发明还提供了一种含有上述MnO₂杂化纳米花的具有催化H₂O₂产生气体的MnO₂杂化纳米花传感器体系。本发明特异性强、灵敏度好、检测成本低、设计简单。
纳米花杂化制备方法和应用刀豆蛋白悬浮食源性病原菌检测磷酸盐缓冲液食源性致病菌传感器体系快速检测特异性强灵敏度离心管孵育混匀制备催化备用震荡保存检测

[发明专利]一种铂-纳米花及其制备方法和应用-CN201810516901.4在审
发明人：万家余;卜胜君;王奎宇;刘文森 -专利权人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所
申请日： 2018-05-25 - 公布日： 2018-10-23 - 主分类号： C12Q1/04 文献下载
摘要：一种铂‑纳米花及其制备方法和应用，属于食源性致病菌快速检测领域。本发明的一种靶标食源性病菌的检测方法采用具有催化H₂O₂效应的铂‑纳米花传感器体系实现，将修饰生物素Biotin的食源性病原菌抗体固定在标记链霉亲和素SA的磁珠上；加入待测样品37℃恒温孵育2h，用0.1～0.5mM磷酸盐缓冲液PBS清洗3次后吸干；加入铂‑纳米花，在靶标食源性病原菌存在时磁珠上的靶标抗体与铂‑纳米花之间形成三明治夹心免疫复合物；加入产气底物H₂O₂，激发H₂O₂分解并产生气体，采用一次性注射器吸取气体并读取气体体积，利用气体体积进行计算实现靶标食源性病菌浓度的测定。本发明操作简单、成本低廉、灵敏度高、特异性好。
纳米花靶标制备方法和应用食源性病原菌食源性磁珠病菌三明治夹心免疫复合物磷酸盐缓冲液食源性致病菌一次性注射器读取传感器体系链霉亲和素待测样品恒温孵育抗体固定快速检测灵敏度生物素产气底物抗体吸干修饰催化分解激发检测

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