本发明提供检测大肠埃希氏菌O157的RPA引物、探针、试剂盒和方法。本发明检测大肠埃希氏菌O157的RPA引物包括针对rfbE基因的上游引物Seq ID No.1和下游引物Seq ID No.2。相对于现有技术,本发明的试剂盒及检测方法,可快速检测样品中是否存在大肠埃希氏菌O157核酸。操作简单,无需特殊昂贵的仪器,在疾病监测、临床诊断和食品安全监测等领域具有重要的应用价值。
本发明提供用于检测无乳链球菌的RPA引物、探针和检测方法。其引物序列如下:针对SIP基因:上游引物SEQ ID No.1:5’‑CACCGGTAAGAACTGTAGCAGCCCCTAGAGTG‑3’下游引物SEQ ID No.2:5’‑CTTCAGTCGCTTGTAACTTACTGTCTGTAGC‑3’。本发明的有益效果包括:(1)本发明将RPA技术与荧光检测相结合,可以快速准确的检测无乳链球菌。(2)本发明特异性强,灵敏度高,可在恒温37‑42℃下进行反应,大大减少了对于昂贵温控设备的要求,且在20min内完成反应,可以快速的对无乳链球菌进行检测,具有较高实用价值。
本发明提供检测单核细胞增生李斯特菌的RPA引物、探针和检测方法。本发明所述的RPA引物和探针是基于单核细胞增生李斯特菌actA基因设计,引物序列见SEQ ID No.1、2和3。所述的探针长度为45‑52bp,在探针中间距5’端30bp的位置处采用dSpacer修饰,dSpacer分子两侧的胸腺嘧啶分别被荧光基团FAM和淬灭基团BHQ1取代,并且在探针的3’末端也需要通过阻塞基团C3Spacer修饰,其序列见SEQ ID No.4。相对于现有技术,本发明的检测方法可以在15min内完成检测,可快速检测样品中是否存在单核细胞增生李斯特菌,并且所建立的RPA方法特异性强,灵敏度高,不需要特殊仪器,在疾病监测、临床诊断和食品安全监测等领域具有重要的应用价值。