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[发明专利]一种肌肉卫星细胞的分离培养方法-CN202011623303.0在审
发明人：张晓南;吴芳春;谷涌泉;侍晓云;张斌 -专利权人：北京昱龙盛世生物科技有限公司
申请日： 2020-12-31 - 公布日： 2021-04-06 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：本发明公开了一种肌肉卫星细胞的分离培养方法，包括以下步骤：无菌条件下剪去腿部皮肤，取腿部肌肉，浸入缓冲液中；去除脂肪、骨骼及肌腱，用缓冲液反复清洗肌肉组织；在无菌条件下将肌肉组织剪成小块，用胶原酶消化，使细胞分离；加入等体积的培养基，吹打后过滤，收集滤液，离心，弃上清，用培养基重悬细胞；将细胞悬液加入到培养皿中，细胞培养箱中培养；差速贴壁法进行细胞纯化培养；待细胞汇合程度达到80％时，用胰蛋白酶消化传代培养。细胞汇合程度达到90％以上时，进行细胞冻存。本申请分离培养方法培养的鸡肌肉卫星细胞，活力更高，数量更多、更易贴壁，可传代性更强，分化率更高，且培养方法，方法简单，方便操作，省时省力。
一种肌肉卫星细胞分离培养方法

[发明专利]一种乳腺上皮细胞分离培养方法-CN202011629300.8在审
发明人：张晓南;吴芳春;谷涌泉;侍晓云;张斌 -专利权人：北京昱龙盛世生物科技有限公司
申请日： 2020-12-31 - 公布日： 2021-04-02 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种乳腺上皮细胞分离培养方法，包括以下步骤：选取妊娠乳腺组织放入加有双抗的PBS缓冲液中反复洗涤，剔除脂肪组织；将乳腺组织剪切成组织块；将剪切的乳腺组织放入培养皿中，加入胶原酶溶液，消化；离心收集沉淀的细胞，用培养液离心，洗涤，重新悬浮细胞团块；用接种培养基重新悬浮细胞，放入培养皿中，在培养箱中培养；更换生长培养基培养，长满传代，倒掉上清液，洗涤，加入胰蛋白酶消化，细胞完全脱落加入终止液终止消化。本申请最大限度地解决了现有技术中细胞活率低、分离数量少、可保存性差的缺陷和不足，以该方法培养获得的乳腺上皮细胞比传统实验室方法获得的细胞活力更高，数量更多、更易贴壁。
一种乳腺上皮细胞分离培养方法

[发明专利]一种人羊膜间充质干细胞的分离培养方法-CN202011623274.8在审
发明人：张晓南;吴芳春;谷涌泉;侍晓云;张斌 -专利权人：北京昱龙盛世生物科技有限公司
申请日： 2020-12-31 - 公布日： 2021-03-30 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明提供一种人羊膜间充质干细胞的分离培养方法，包括从胎盘上剥离羊膜层、清洗、剪碎和消化，其特征在于：还包括从胎盘上剥离羊膜层后，除去基底膜下的基质组织使分离的羊膜尽可能的薄和除去血细胞，然后再进行剪碎和消化；其中胎盘组织为新鲜的足月顺产胎儿的胎盘组织，且胎盘组织经过消毒、清洗后即在无菌条件下，从胎盘上分离羊膜层；且人羊膜不需要先进行上皮细胞的消化分离，而是直接用于消化分离人羊膜间充质干细胞。采用本发明的人羊膜间充质干细胞的分离培养方法分离得到的人羊膜间充质干细胞纯度高、活力强、增值快。结论建立了人羊膜间充质干细胞分离、培养及鉴定方法。hAMSCs具有骨髓间充质干细胞的表型特征。
一种羊膜间充质干细胞分离培养方法

[发明专利]一种软骨细胞的体外培养方法-CN202011629268.3在审
发明人：张晓南;吴芳春;谷涌泉;侍晓云;张斌 -专利权人：北京昱龙盛世生物科技有限公司
申请日： 2020-12-31 - 公布日： 2021-03-30 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：本发明公开了一种软骨细胞的体外培养方法，包括以下步骤：关节表面削下软骨组织片，在添加了双抗的PBS中，反复清洗；将清洗过后的软骨组织置于培养基中，将软骨组织切成碎片，再用含双抗的PBS充分冲洗切碎的软骨组织；收集切碎的软骨组织离心，加入消化液，消化；离心收集细胞，加入PBS清洗细胞，在细胞团中加入培养液制成细胞悬液，计数细胞，调节细胞密度；接种，加入FBS的低糖DMEM培养基，再放置于饱和湿度培养箱中培养；细胞融合并覆盖瓶底80％～90％时，即可传代培养。本申请最大限度地解决了现有技术中细胞活率低、分离数量少、可保存性差的缺陷和不足，以该方法培养获得的乳腺上皮细胞比传统实验室方法获得的细胞活力更高，数量更多、更易贴壁。
一种软骨细胞体外培养方法

[发明专利]一种血管内皮祖细胞的分离培养方法-CN202010920064.9在审
发明人：张晓南;吴芳春;田增民;侍晓云;张斌 -专利权人：北京昱龙盛世生物科技有限公司
申请日： 2020-09-04 - 公布日： 2021-01-12 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供血管内皮祖细胞的分离培养方法，包括分离和培养，分离步骤为：收集、稀释样品，叠加到Ficoll细胞分离液上；离心；加入阻断剂，混匀；加入磁珠耦联的CD133单克隆抗体,充分混匀，孵育；用PBS洗涤细胞，以去除未结合的抗体；用PBS缓冲液重悬细胞以备用；将分离柱置于磁场中，以分离缓冲液冲洗分离柱；将标记CD133单抗的细胞悬液缓慢贴壁加入分离柱，避免产生气泡，细胞悬液从分离柱下端自然流出；用分离缓冲液洗涤分离柱，洗掉不能结合到柱上的细胞；将分离柱移除磁场，加分离缓冲液加压洗脱吸附细胞，即得CD133阳性的血管内皮祖细胞。本发明分离培养得到的血管内皮祖细胞纯度高、活力强、增殖快。
一种血管内皮细胞分离培养方法

[发明专利]一种人牙髓细胞分离培养方法-CN202010614171.9在审
发明人：张晓南;吴芳春;谷涌泉;侍晓云;张斌;吴刘兵 -专利权人：北京昱龙摩尔国际生物医学研究院
申请日： 2020-06-30 - 公布日： 2020-09-15 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明提供了一种人牙髓细胞分离培养方法，向原代培养基中添加葡甘聚糖和海藻酸钠，可以有效促进原代培养过程中细胞贴壁生长和复制，并且能够达到与传统包被培养皿或添加黏连蛋白相当的贴壁效果，既可以省略预先包被的操作，相比层黏连蛋白又更加经济，从而在提高贴壁效果的同时有效降低时间成本和经济成本，并得到大量、高活性的牙髓干细胞；同时，本发明提供的培养基无需血清，通过其中各种成分的配合能有效促进牙髓细胞的生长和复制、提高细胞的分化能力，可以在确保性能的前提下克服血清自身的缺陷，从而有效提高了牙髓细胞的培养效果。
一种牙髓细胞分离培养方法

[发明专利]一种人牙周膜细胞分离培养方法-CN202010530577.9在审
发明人：张晓南;吴芳春;谷涌泉;侍晓云;张斌;吴刘兵 -专利权人：北京昱龙摩尔国际生物医学研究院
申请日： 2020-06-11 - 公布日： 2020-09-11 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：本发明提供了一种人牙周膜细胞分离培养方法，该方法包括以下步骤：S1：在无菌条件下收集的牙齿，用含有双抗的磷酸盐缓冲液清洗，刮取牙根中1/3牙周膜组织放入离心管中，在15‑20℃条件下用Ⅰ型胶原酶和中性蛋白酶混合消化，每消化40‑60min，过滤、离心，将已分离的人牙周膜细胞放置于细胞培养液中保存，将上清液中未消化的组织继续在15‑20℃条件下消化20‑30min，反复多次直至所有的组织块均消化完全；S2：将消化后的细胞悬液过滤，离心，弃上清，加入细胞培养液以3*106的密度接种在培养瓶中培养，隔日换液；S3：当细胞长到80％用胰蛋白酶消化传代培养；本发明提供的方法能够显著提高培养的人牙周膜细胞的活率、降低污染率。
一种人牙周膜细胞分离培养方法

[发明专利]一种口腔黏膜上皮细胞分离培养方法-CN202010530573.0在审
发明人：张晓南;吴芳春;谷涌泉;侍晓云;张斌;吴刘兵 -专利权人：北京昱龙摩尔国际生物医学研究院
申请日： 2020-06-11 - 公布日： 2020-08-28 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供一种口腔黏膜上皮细胞分离培养方法，所述方法包括无菌条件下获取废弃的口腔黏膜，除去肉眼可见下的多余黏膜组织，置于含有10％血清的DMEM中，用PBS洗净血迹，2.5g/L洗必泰液浸泡5‑8min，切成大小均匀的组织块，用含有双抗的PBS冲洗3‑5次；将黏膜组织块消化1h；用眼科镊轻轻提拉上皮层和上皮下层，将上皮层剥下，弃去上皮下层；用PBS轻轻冲洗上皮层，然后置入消化液内消化30min后终止消化，轻轻吹打成单细胞悬液；将单细胞悬液接种于含有血清培养液的培养瓶中，贴壁培养；所述方法保证了胰蛋白酶活性的基础上，提高了分离率，降低了成纤维细胞的污染率。
一种口腔黏膜上皮细胞分离培养方法

[发明专利]一种人肾上皮细胞分离与培养方法-CN202010727594.1在审
发明人：张晓南;吴芳春;侍晓云;谷涌泉;张斌;霍文卓 -专利权人：北京昱龙盛世生物科技有限公司
申请日： 2020-07-27 - 公布日： 2020-08-28 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供一种肾上皮细胞分离与培养方法，通过该细胞培养方法所获所获得肾小管和肾小球上皮细胞形态多为鹅卵石样，体积较大，镜下透明度折光性强，各细胞相互紧密衔接，免疫化学染色角蛋白18阳性表达。
一种上皮细胞分离培养方法

[发明专利]一种角膜缘上皮干细胞分离培养方法-CN202010683748.1在审
发明人：张晓南;吴芳春;侍晓云;谷涌泉;张斌;霍文卓 -专利权人：北京昱龙盛世生物科技有限公司
申请日： 2020-07-16 - 公布日： 2020-08-21 - 主分类号： C12N5/0797 文献下载
摘要：本发明提供一种角膜缘干细胞的分离培养方法，通过本发明获得的角膜缘上皮干细胞具有较高的细胞活性，较强的细胞增殖能力，该培养方法简单有效且排斥反应低。原代培养的细胞个数为9.5✕105个，流式细胞检测表面标志物的阳性表达率，结果为抗体AE5角膜成纤维细胞的表面标志性抗体阴性表达，CX43角膜干细胞为阴性表达，PCNA抗体阳性表达，BrdU抗体阳性表达。
一种角膜上皮干细胞分离培养方法

[发明专利]一种可调控表面温度的双层核壳结构纳米颗粒-CN202010107951.4在审
发明人： 侍晓云;李佳玉;杨振宇 -专利权人：南京理工大学
申请日： 2020-02-21 - 公布日： 2020-08-07 - 主分类号： C09K5/14 文献下载
摘要：本发明为一种可调控表面温度的双层核壳结构纳米颗粒，包括：纳米球和纳米壳，纳米壳覆盖在纳米球外部；纳米球由非吸收性材料制成，球壳由金属材料制成。本发明提供的纳米颗粒具有特殊的等离激元共振耦合特性，可以激发两个表面的局域表面等离激元，从而可以实现红外波段调节稳态温度、LSPR峰最大化的效果，且结构简单，易于加工。
一种调控表面温度双层结构纳米颗粒

[发明专利]一种表皮干细胞的分离培养方法-CN202010607136.4在审
发明人：张晓南;吴芳春;谷涌泉;侍晓云;张斌 -专利权人：北京昱龙盛世生物科技有限公司
申请日： 2020-06-30 - 公布日： 2020-08-07 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种表皮干细胞的分离培养方法，包括以下步骤：（1）取人皮片冲洗后，采用蛋白酶消化，分离表皮与真皮；（2）消化表皮；（3）终止消化，离心重悬获得表皮干细胞单细胞悬液；（4）接种，培养箱中培养；（5）去除滋养层细胞后，消化传代；（6）检测。本申请的表皮干细胞分离与培养方法是一种能够提高表皮干细胞活性和增殖能力的体外培养方法，且方法简单，方便操作，省时省力。
一种表皮干细胞分离培养方法

[发明专利]一种增强太阳光全光谱吸收特性的复合纳米颗粒-CN202010107664.3在审
发明人： 侍晓云;李佳玉;杨振宇 -专利权人：南京理工大学
申请日： 2020-02-21 - 公布日： 2020-08-04 - 主分类号： C09K11/60 文献下载
摘要：本发明公开一种增强太阳能全光谱体吸收特性的复合纳米颗粒，具体为Fe3O4@SiO2@Au复合纳米颗粒；该复合纳米颗粒由不同材料的球壳组合而成，可以激发多个表面的局域表面等离激元，从而在较宽波段的太阳光谱下具有良好的吸收效果；在太阳光谱能量较集中的波长为300nm～1000nm范围内具有较高的吸收效率，本发明考虑的复合纳米颗粒结构简单，易于加工，可用于提高光热转换效率。
一种增强太阳光光谱吸收特性复合纳米颗粒

[发明专利]一种用于培养心肌祖细胞的试剂盒-CN201611082288.7有效
发明人：张晓南;吴芳春;陈虎;张斌;侍晓云 -专利权人：张晓南
申请日： 2016-11-30 - 公布日： 2020-02-07 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明提供一种用于培养心肌祖细胞的试剂盒，其内设有若干试剂瓶，若干所述试剂瓶内分别盛装有培养液I、培养液II、生长因子I、生长因子II、生长因子III、生长因子IV、消化液、清洗液、冻存液和细胞种子。本发明提供的试剂盒可以培养扩增心肌祖细胞并进行冷冻保存，解决了心肌祖细胞培养存活率低、培养效率不高、培养批次间差别大、冻存复活率不理想等问题，使心肌祖细胞在理想营养平衡状态下进行扩增而不发生分化，为利用心肌祖细胞进行进一步实验研究和医学治疗提供了丰富的来源，非常适用于培养心肌祖细胞。
祖细胞心肌生长因子培养液试剂盒试剂瓶扩增冷冻保存实验研究细胞种子医学治疗营养平衡存活率冻存液清洗液消化液冻存复活盛装分化

[发明专利]一种用于培养肝源性干细胞的试剂盒-CN201611082265.6有效
发明人：张晓南;吴芳春;陈虎;张斌;侍晓云 -专利权人：张晓南
申请日： 2016-11-30 - 公布日： 2019-12-24 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明提供一种用于培养肝源性干细胞的试剂盒，其内设有若干试剂瓶，若干所述试剂瓶内分别盛装有培养液、培养基添加剂、生长因子I、生长因子II、消化液、清洗液、冻存液和细胞种子。本发明提供的试剂盒可以对肝源性干细胞进行培养扩增和冷冻保存，解决了肝源性干细胞培养培养效率低、培养批次间差别大、冻存保存后复活率不理想等问题，使肝源性干细胞在理想营养平衡状态下进行高效扩增，大大节约了培养扩增的时间，非常适用于培养肝源性干细胞，为利用肝源性干细胞进行进一步实验研究和医学治疗提供了丰富的来源。
一种用于培养肝源性干细胞试剂盒

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