本发明公开了一种P450酶突变体、编码基因及其在制备皮质醇中的应用,属于生物工程技术领域。所述P450酶突变体是氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的智人来源CYP11B1通过氨基酸突变所得,氨基酸突变的位点为S146V、H331D、L440F中的至少一个。本发明提供的P450酶突变体相对野生型CYP11B1在大肠杆菌中具有更高的可溶性表达水平,构建的重组表达菌株的催化水平更高,可以以11‑脱氧皮质醇为底物制备皮质醇,产物的产率高,无副产物产生,具有很好的工业化应用前景。
本发明公开了一种转氨酶突变体、编码基因及其在制备(S)‑1‑(3‑甲氧苯基)乙胺中的应用,属于生物工程技术领域。所述转氨酶突变体是氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的巨大芽孢杆菌来源转氨酶通过氨基酸突变所得,氨基酸突变的位点为T295C、L387A、V436A中的至少一个,或者A242V与T295C、L387A、V436A中至少一个的组合。本发明提供的转氨酶突变体相对野生型转氨酶具有更高的酶活力,可以以3‑甲氧基苯乙酮为底物制备(S)‑1‑(3‑甲氧苯基)乙胺,产物的收率高,无副产物产生,具有很好的工业化应用前景。
本发明涉及睾酮制备技术领域,公开了可用于不对称催化制备睾酮的短链羰基还原酶PpYSDR突变体,该突变体由短链羰基还原酶PpYSDR的氨基酸序列的第85位甲硫氨酸突变为谷氨酰胺、第88位亮氨酸突变为天冬酰胺、第136位亮氨酸突变为丙氨酸和第143位天冬氨酸突变为丙氨酸中的一种或几种后得到;短链羰基还原酶PpYSDR的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。上述突变得到的短链羰基还原酶PpYSDR的突变体具有很高的催化雄烯二酮转化成睾酮的活性,可以游离酶、固定化酶或重组游离细胞的形式催化合成睾酮,雄烯二酮的转化率高,睾酮的收率高,选择性高。
本发明属于生物工程技术领域,具体涉及一种短链脱氢酶的突变体,所述突变体为突变体L104A、突变体A150Y、突变体Y155A、突变体I158A、突变体I202A或者突变体T205A;所述短链脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的短链脱氢酶突变体相对野生型短链脱氢酶有更高的酶活性,可以泼尼松或者配合水解酶以醋酸泼尼松为底物制备泼尼松龙,底物的转化率高,产物的收率高,无副产物产生,而且反应可在更高的底物浓度水平下进行,适宜规模化生产。