[发明专利]一种定向减毒的痘苗病毒疫苗

说明书

本发明涉及一种重组痘苗病毒及其用途，该重组痘苗病毒相对于痘苗病毒天坛株，缺失了TK基因、F4L基因和B2R基因中的至少一种。本发明的重组痘苗病毒具有低毒性、能完整复制且具有更高免疫原性的特点。因此，本发明提供的重组痘苗病毒有更高的安全性和增强的免疫原性。本发明提供的重组痘苗病毒作为疫苗具有更高的应用价值，可用于预防痘病毒科病毒的感染，以及作为病毒载体用于构建其他感染性疾病疫苗和肿瘤疫苗等。

技术领域

本发明属于疫苗领域，尤其涉及一种重组痘苗病毒及其用途。

背景技术

痘病毒(Poxvirus)是病毒粒最大的一类DNA病毒，包括多种类型：痘苗病毒(Vaccinia virus)、天花病毒(Variola virus)、牛痘病毒(Cowpox virus)和猴痘病毒(Monkey poxvirus)等。上世纪以前，天花病毒曾在全球范围内传播，致死率达30％，而后痘苗病毒被用作疫苗株，用于天花的预防免疫，在消灭天花的过程中发挥重大作用，而后研究发现，用于预防天花的痘苗病毒株接种后，对猴痘等其他正痘病毒感染亦具有保护作用。1978年，WHO宣布天花病毒被消灭，痘苗病毒的接种也随之停止，但因痘苗病毒具有宿主范围广、非必需基因多、高度保守性、外源基因的容量大、胞质复制等特点，其作为疫苗载体，对于研发新型的感染型疾病疫苗载体及溶瘤病毒，仍具有进一步研究价值。

用于预防天花的痘苗病毒，即初代痘苗病毒(vaccinia virus，VACV)，在哺乳动物细胞中具有完整的复制能力。初代疫苗株的生产多在动物体内进行，将疫苗毒株接种在动物皮肤淋巴结内复制扩增后，制成疫苗株用于人的免疫接种，如在美国储存生产的NewYork City Board of Health(NYCBH)株，欧洲多国储存使用的Lister毒株，中国的天坛株(VACV Tiantan，VTT)，丹麦的Copenhagen(Cop)株等。初代疫苗株，虽保护率高，但是在人群中具有一定的副作用，40-47％的注射部位疼痛，5-9％出现发热，且有个别免疫力异常者接种者后出现湿疹、脑炎等症状。

随着疫苗生产技术的发展，疫苗毒株的生产转向组织或鸡胚细胞培养，由此产生第二代痘苗病毒株。如，lisiter毒株在兔肾细胞中培养产生的RIVM毒株及在鸡胚尿囊膜中培养而成的Lister/CEP毒株，NYCBH株在MRC-5细胞中传代而形成的CCSV毒株及ACAM1000、ACAM2000毒株等。第二代免疫株与初代疫苗株具有相似的免疫效果，且ACAM2000疫苗株相较于初代疫苗株，神经毒性相对降低，但作为疫苗株免疫人体后仍会产生一定的副作用。

为解决前两代疫苗株的相对安全性问题，进一步开发出减毒的第三代疫苗株。由具有复制能力的一、二代疫苗株在培养细胞内持续传代，基因突变在代间积累，宿主范围因子、病毒毒力基因等发生改变，进而筛选出低毒性的疫苗毒株。第三代疫苗株主要包括MVA株、LC16m8株及DI株。日本研究者利用Lister毒株，低温条件下在兔肾上皮细胞(PRK)中传代，得到减毒株LC16m8，基因突变位点相对较少，仍能在人细胞内复制。日本初代Dairen疫苗毒株在1日龄鸡胚中传代后，得到减毒株DI，基因缺失位点多于LC16m8株，有19个开放阅读框缺失，在大多数哺乳动物细胞内不能复制。毒性最弱的第三代疫苗株为MVA株，该疫苗株由COP株在鸡胚成纤维细胞中传代500多次后分离得出，相较于母代CVA株，其基因组缺失约15％，虽能感染人细胞，并编码早期、中期和晚期蛋白，但不能组装成有感染性的病毒颗粒，故而不能在包括人在内的多种哺乳动物细胞内复制，毒性显著降低，且病毒传代效果要好于DI株，作为新一代疫苗载体，被广泛用于防治感染性疾病和肿瘤。但是对比不同疫苗株的免疫效果发现，同等剂量下，复制缺陷型毒株需要比初代疫苗株高1-2个对数级别的病毒滴度或者采用加强免疫的方案，才能达到初代疫苗的免疫效果，且抗体保护时间、中和效果、特异性细胞免疫等仍不及复制完整的初代疫苗效果。

因此，开发一款具有完整复制能力、毒性减低、免疫原性增强的新一代候选痘苗病毒，用于预防痘病毒科病毒导致的动物源性感染及人际间感染的传播，以及作为新型的疫苗载体，很有必要。

发明内容