[发明专利]含有猴痘病毒E8L抗原的融合蛋白及其制备方法

说明书

本发明公开了含有猴痘病毒E8L抗原的融合蛋白及其制备方法。本发明涉及生物技术领域，具体涉及含有猴痘病毒E8L抗原的融合蛋白及其制备方法。本发明提供的融合蛋白为将氨基酸序列是SEQ ID No.1的多肽融合于猴痘病毒E8L抗原的N端得到的蛋白质，融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.5、SEQ ID No.5的第1‑291位或SEQ ID No.5的第1‑296位。本发明采用信号肽引导猴痘病毒E8L真核细胞分泌表达，其中白蛋白信号肽Al引导猴痘病毒E8L抗原分泌表达水平显著优于荧光素酶信号肽Ga和抗体轻链信号肽Lc，更适用于大规模工业化生产，降低生产成本。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种猴痘病毒E8L抗原制备方法。

背景技术

猴痘病毒基本的感染形态为成熟病毒粒子(mature virion，MV)，除此之外，还有一种形态：成熟病毒粒子外还包绕有一层来源于内质网膜的脂质膜(extracellularenveloped，EV)。其中，E8L抗原为猴痘病毒成熟病毒粒子的膜蛋白，也是重要的免疫靶点之一。因此，制备E8L蛋白为猴痘病毒检测试剂或疫苗的关键产品研发的关键步骤。

发明内容

本发明所要解决的主要问题是如何制备猴痘病毒E8L抗原。

为了解决上述问题，本发明提供了一种白蛋白信号肽(信号肽Al，SEQ ID No.1)，信号肽Al可引导猴痘病毒E8L抗原分泌至培养上清，经过镍柱亲和层析即可获得高纯度抗原，且其分泌表达产量显著高于荧光素酶信号肽(信号肽Ga)和抗体轻链信号肽(信号肽Lc)。

本发明首先提供了一种融合蛋白。

本发明提供的融合蛋白为将为将氨基酸序列是SEQ ID No.1的多肽融合于猴痘病毒E8L抗原的N端得到的蛋白质。

进一步地，所述融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.5、SEQ ID No.5的第1-291位或SEQ ID No.5第1-296位。

SEQ ID No.5的第1-16位为信号肽Al(即SEQ ID No.1)，第18-291位为所述猴痘病毒E8L抗原，第292-296位为Linker接头，第297-302位为组氨酸标签。

本发明还提供了编码上述融合蛋白的核酸分子。

进一步地，所述核酸分子自5’端到3’端依次由上述多肽的编码基因和猴痘病毒E8L抗原的编码基因组成。

更进一步地，所述多肽的编码基因可为如下任一：

(a1)编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.2的DNA分子；

(a2)在严格条件下与(a1)限定的DNA分子杂交且编码所述多肽的DNA分子；

(a3)与(a1)或(a2)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码所述多肽的DNA分子。

更进一步地，所述猴痘病毒E8L抗原的编码基因可为如下任一：

(b1)编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.4所示的DNA分子；

(b2)在严格条件下与(b1)限定的DNA分子杂交且编码相同蛋白质的DNA分子；

(b3)与(b1)或(b2)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码相同蛋白质的DNA分子。

更加具体地，所述核酸分子可为编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.8、SEQ IDNo.8的第1-888位或SEQ ID No.8的第1-903位。