[发明专利]制3β,7β-二羟基-5α-H的UDCA异构体方法

说明书

本发明提供一种制3β,7β‑二羟基‑5α‑H的UDCA异构体方法，所述方法包括：第一步，使用如化合物I所示的3,7‑二酮‑5α‑胆甾烷‑24‑酸在7β‑类固醇脱氢酶存在下生成如中间态I所示的化合物3‑酮‑5α‑H‑7β‑羟基‑胆甾烷‑24‑酸；第二步，再在3β‑类固醇脱氢酶存在下生成如化合物II所示的3β,7β‑二羟基‑5α‑H的UDCA异构体。本发明选择特定的原料和方法步骤，并用酶催化代替繁琐的化学合成步骤，酶催化反应专一性强，副产物极少，获得的目标产物纯度高，步骤简便，反应条件温和，极大地减少了有毒有害化学试剂的使用；整个过程反应步骤少，物料的损失少，收率高。

技术领域

本发明属于有机化学领域，具体属于一种制备3β,7β-二羟基-5α-H的UDCA异构体的方法。

背景技术

熊去氧胆酸，化学名为3α，7β-二羟基-5β-胆烷酸，英文名为Ursodeoxycholicacid，化学式为C₂₄H₄₀O₄，简称UDCA，其结构式如下：

熊去氧胆酸是一种无毒性亲水胆酸，能竞争性地抑制毒性内源性胆酸在回肠的吸收，通过激活钙离子与蛋白激酶C组成的信号网络，激活分裂活性蛋白激酶来增强胆汁淤积肝细胞的分泌能力，使血液及肝细胞中的内源性疏水胆酸浓度降低，达到抗胆汁淤积的作用。

熊去氧胆酸的全球市场需求量大，中国每年以中间体或原料药形式出口国外达到500吨以上，产值15亿人民币以上。

熊去氧胆酸广泛应用于医药保健品，其中用于制药的比例最大，2019年约占78％，而杂质对药品的安全性和有效性至关重要，药监部门对其也越来越重视，对药品杂质进行研究已成为目前药品生产研发必不可少的一步。

从动物内脏中提取的熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸及胆酸结构中5位氢原子为β位，但是以植物源发酵产物BA(21-羟基-20-甲基孕甾-4-烯-3-酮)经过一系列合成制备的3,7-二酮-5β-胆甾烷-24-酸存在异构体3,7-二酮-5α-胆甾烷-24-酸，其制备路线的最后几步如下所示：

在由上述3,7-二酮-5β-胆甾烷-24-酸继续反应制备UDCA的过程中，上述3,7-二酮-5α-胆甾烷-24-酸会引入新的杂质，而该杂质会对UDCA的质量产生影响。因而对于植物源发酵产物BA制备UDCA的方法来说，制备出高纯度的相应杂质以及确认其结构，对标定产品UDCA的纯度能起到关键性的作用。

但现有技术中制备高纯度的UDCA异构体存在诸多困难，其制备步骤繁琐，花费的人力物力成本高；精制过程麻烦，收率特别低；且过程中需使用多种对人体有害的化学试剂，如甲醇、二氯甲烷、乙酸酐等。

因此，本领域需要一种便捷环保地制备高纯度的3β,7β-二羟基-5α-H的UDCA异构体的方法。

发明内容

本发明提供一种制3β,7β-二羟基-5α-H的UDCA异构体方法，所述方法包括：第一步，使用如化合物I所示的3,7-二酮-5α-胆甾烷-24-酸在7β-类固醇脱氢酶存在下生成如中间态I所示的化合物3-酮-5α-H-7β-羟基-胆甾烷-24-酸；第二步，再在3β-类固醇脱氢酶存在下生成如化合物II所示的3β,7β-二羟基-5α-H的UDCA异构体；

在一种具体的实施方式中，所述第一步中，先在反应容器中加入异丙醇、水、化合物Ⅰ和葡萄糖，用碱调节pH至6.5-7.5，调节反应温度为25-40℃，待充分混匀后，再加入葡萄糖脱氢酶、7β-类固醇脱氢酶、辅酶，搅拌混匀后，用碱调节pH＝6.5-7.5反应，且第一步的反应时间为5～12h；优选所述碱为氢氧化钠溶液，优选反应温度为30-35℃。