[发明专利]鉴别‘细桂叶’滇山茶品种的分子特异性标记引物及鉴定方法

说明书

本发明公开了鉴别‘细桂叶’滇山茶品种的分子特异性标记引物及鉴定方法；所述引物序列上游引物：5’‑CTCCCAACCCATCGTCCTTT‑3’；下游引物：5’‑CCTTGCCGCTCTTGCAATC‑3’。利用本发明开发的分子特异性标记引物能对‘细桂叶’滇山茶品种与其它滇山茶主要栽培品种进行快速、准确的分子鉴定，尤其适合对未到花期植株的滇山茶品种的早期鉴定，以及形态特征相似的品种进行鉴别，如‘细桂叶’等。

技术领域

本发明涉及鉴别‘细桂叶’滇山茶品种的分子特异性标记引物，以及该特异性标记引物对‘细桂叶’滇山茶品种进行快速鉴定的方法。

背景技术

滇山茶(Camellia reticulata)，属于山茶科(Theaceae)山茶属(Camellia)红山茶组(sect Camellia)，常绿阔叶乔木。滇山茶原产中国云南，适应我国西南山地及其独特的高原季风气候，是中国的特有种、国家重点二级保护植物，且被IUCN(InternationalUnion for Conservation of Nature)列为“vulnerable”(易危种)。它不仅是世界珍稀花卉之一、最受云南人民喜爱的八大名花之首，同时也是云南省花、昆明市花，更是被广泛认可的古老而名贵的观赏树木，已被作为观赏植物栽培了1500多年，具有极高的经济价值。加之我国民众自古即高度重视观赏树木的文化韵味，千姿百态、变化多端的滇山茶之娇艳，被广泛地应用到了园林绿化及盆栽观赏中。此外，又由于其树体高大(最高25m)而名扬海外，受到世界园艺界的珍视，先后被引种到全球多地进行栽培。

滇山茶栽培种质的变异丰富，园艺品种有100多个，其中不乏价格昂贵的名贵品种，如‘恨天高’、‘紫袍’、‘细桂叶’等。实践中，一些品种的形态特征相似度高，很难从形态特征上进行鉴别，能准确掌握滇山茶的形态分类技术的仅有少数专业人士，给滇山茶的应用、推广以及新品种选育带来很多困难。尤其是以下两个问题一直较难解决：一是未到花期植株的品种早期鉴定，二是形态特征相似的品种鉴别。

鉴于上述情况，有必要研究鉴别‘细桂叶’滇山茶品种的分子特异性标记引物及鉴定方法以解决上述技术问题。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供‘细桂叶’滇山茶品种的分子特异性标记引物，本发明的第二个目的在于提供利用的分子特异性标记引物对‘细桂叶’滇山茶品种进行鉴定的方法。本发明旨在解决无法对未到花期且形态特征相似的滇山茶品种进行早期鉴定的技术问题。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一个目的是这样实现的，‘细桂叶’滇山茶品种的分子特异性标记引物，该特异性标记引物序列如下：

上游引物：5’-CTCCCAACCCATCGTCCTTT-3’；

下游引物：5’-CCTTGCCGCTCTTGCAATC-3’。

本发明的第二个目的是这样实现的，利用所述分子特异性标记引物对‘细桂叶’滇山茶品种进行鉴定的方法，所述方法为：

(1)提取待测滇山茶品种叶片的基因组DNA；

(2)以步骤(1)提取的滇山茶品种叶片的基因组DNA作为扩增模板，利用权利要求1所述分子特异性标记引物作为扩增引物，进行PCR扩增，获得PCR扩增产物；

(3)对步骤(2)中的扩增产物进行电泳检测，电泳结束后用EB染色，于Tanon凝胶成像仪拍照记录结果，将电泳结果与DL2000Marker进行对比，若条带大小为1100bp，则对扩增产物进行DNA双向测序，获得扩增产物DNA序列；