[发明专利]一种制备枳壳总黄酮的方法

说明书

本发明公开了一种双水相法优化提取枳壳总黄酮的方法。通过本发明的超声波辅助双水相优化提取枳壳总黄酮的方法获得枳壳总黄酮最优提取工艺，与传统乙醇回流法提法相比，双水相提取缩短提取时间，而且在双水相萃取过程中，大多数黄酮类物质富集于上相，而糖、蛋白质等杂质富集于下相，提高了枳壳总黄酮的提取效率和纯度。通过外体外抗氧化活性测定表明，枳壳总黄酮对DPPH自由基和ABTS自由基均具有清除作用；枳壳总黄酮在10‑800μg/mL范围时，对DPPH自由基清除率由27.7%升至98.57%，枳壳总黄酮为800μg/mL时清除率与维生素C相当。枳壳总黄酮提取物ABTS自由基在10‑3000μg/mL范围时，清除率由13.55%升至98.4%。

技术领域

本发明涉及一种枳壳总黄酮双水相的提取方法，属中药制药工程技术领域。

背景技术

枳壳(Fructus Aurantii)为芸香科柑橘属植物酸橙及其栽培变种的干燥未成熟果实，性微寒，味苦、辛、酸，归脾、胃经，具有理气宽中、行滞消胀功效，为常用理气药之一。最早记载于南北朝《雷公炮炙论》。研究显示，枳壳主要含有黄酮类、多糖、生物碱、挥发油等，具有一定升压、抗氧化、抗凋亡、抗休克、抗炎、抗抑郁、免疫调节、抗肿瘤等作用。

目前现有技术如CN 102406734 B枳壳水煎煮反应所需时间长且总黄酮含量为33.61 %，低于本发明。CN 103191236A枳壳乙醇回流反应时间长，有机溶剂用量大，总黄酮苷36.84 %，低于本发明。本发明使用双水相提取，大多数黄酮类物质富集于上相，而糖、蛋白质等杂质富集于下相，提高了枳壳总黄酮的提取效率和纯度。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种双水相法优化提取枳壳总黄酮的方法。

本发明是通过以下技术方案来实现的：一种枳壳总黄酮的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）以枳壳粉末为原料，先进行枳壳总黄酮提取的超声辅波助双水相体系选择，在进行枳壳总黄酮提取的单因素试验，包括液料比的选择、提取时间的选择、提取温度的选择、NaH₂PO₄·2H₂O质量分数选择和丙酮质量分数选择；

（2）以液料比、提取时间、提取温度、NaH₂PO₄·2H₂O质量分数和丙酮质量分数为影响因素，以枳壳中所提取的黄酮得率为评价标准，设计正交试验，进行分析，筛选出对枳壳总黄酮提取影响显著的因素；

(3)对影响因素进行方差分析，确定提取枳壳总黄酮的最佳提取工艺。

优选的，在步骤(1)前还包括以下步骤：将购买的枳壳片，置于60 ℃烘箱烘干，粉碎枳壳果实，将枳壳粉末筛至60目。

优选的，步骤(1)所述的超声辅助双水相体系选择，其特征在于，所述的超声辅助双水相体系选择：超声提取条件为，超声功率300 W，双水相体系按质量配比，系统为20 g，分别称取15 wt%不同无机盐((NH₄)₂SO₄，NaH₂PO₄·2H₂O，Na₂HPO₄·12H₂O，Na₂CO₃)，35 wt %不同有机溶剂与一定质量的蒸馏水，形成提取溶剂, 所述的不同有机溶剂指乙醇、丙酮、正丁醇、异丙醇；枳壳粉末与提取溶剂的液料比为40 g/g，提取温度为40 ℃，提取时间为20min，获得上清液的离心条件为4000 r/min、离心10 min。

优选的，步骤(1)所述的超声辅助双水相体系选择，其特征在于，所述双水相体系选择为15 wt % NaH₂PO₄·2H₂O，35 wt %丙酮与一定质量的蒸馏水的混合物。