[发明专利]高稳定性重组降钙素原及其表达载体和应用

说明书

本发明公开了高稳定性重组降钙素原及其表达载体和应用，重组PCT的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明的重组降钙素原，具有很好的稳定性，同时保持有天然PCT的抗原性，可以作为替代天然PCT的PCT标准品使用，用于PCT抗原浓度的检测。

技术领域

本发明属于蛋白领域，具体涉及高稳定性重组降钙素原及其表达载体和应用。

背景技术

PCT（降钙素原，procalcitonin）是血清降钙素 (Calcitonin ，CT)无活性的前肽物质 ，由位于11号染色体 (11p1514)上的Calc-I基因编码，通过选择性剪接(编码1～4外显子)生成Calc-ImRNA ，正常条件下，PCT mRNA在甲状腺滤泡旁细胞粗面内质网内翻译成含141个氨基酸残基的前PCT ，分子质量为16kD。前PCT进入内质网膜，经糖基化和特异性酶切除N-末端的信号肽，生成含 116个氨基酸残基的PCT，在高尔基体中，经系列水解酶作用最终形成PCT氨基多肽 (1- 57aa)、降钙素(60-91aa)及降钙蛋白(96-116aa)。由此可以看出58-59aa ，92-95aa分别为水解位点，这些水解酶的存在可能是导致PCT参考品的不稳定的重要因素。

在局部感染、病毒感染、慢性非特异性炎症等患者的血清PCT浓度不增加或轻微增加。这就决定了PCT 的高度特异性，因此可用于此类疾病的鉴别诊断；并且PCT 浓度和疾病严重程度成正相关，并随着病情的发展变化而变化，因而PCT 又可作为判断病情与预后以及疗效观察的可靠指标。如PCT 升高对细菌感染导致的脓毒症特异性很高，其在人体内的浓度高低可作为诊断脓毒症和鉴别严重细菌感染的生物标志物。

目前检测PCT的方法有很多，但均需要以PCT制备梯度浓度的标准品，以此计算样本中PCT的含量，而天然PCT中含有水解位点导致其不稳定极易降解，影响检测结果的准确性和可靠性。为此，需要开发一种高稳定性的重组PCT，以替代天然PCT，获得更准确、可靠的检测结果。

CN104610443A公开了一种高稳定性重组降钙素原、制备方法及用途，其利用柔性肽链连接臂-GG-与-SGGG-替换了PCT中易于降解的58-59aa，92-95aa两部分肽链，获得高稳定性PCT抗原，破坏7天后，该重组PCT的稳定性为62.53±0.41%，在实际使用中仍难以满足要求。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供高稳定性重组降钙素原及其表达载体和应用。

本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提供：

一种重组降钙素原，其氨基酸序列为：APFRSALESSPADPATLSEDEARLLLAALVQDYVQMKASELEQEQEREGSSLDSPRSKKCGNLSTCMLGTYTQDFNKFHTFPQTAIGVGAPGKKKDMSSDLERDHRPHVSMPQNAN。

在一些重组降钙素原的实例中，其C端或N端还连接有蛋白分离标签。

在一些重组降钙素原的实例中，所述蛋白分离标签通过柔性肽连接在所述重组降钙素原的C端或N端。

在一些重组降钙素原的实例中，所述蛋白分离标签为组氨酸分离标签。

在一些重组降钙素原的实例中，所述柔性肽由2～4个甘氨酸组成。

在一些重组降钙素原的实例中，所述蛋白分离标签连接在重组降钙素原的C端。

本发明的第二个方面，提供：

一种表达载体，其插入有表达本发明第一个方面所述重组降钙素原的核苷酸序列。

在一些表达载体的实例中，所述核苷酸序列经密码子偏好优化。