[发明专利]一种重组大肠杆菌及产氢应用

权利要求书

1.一种重组大肠杆菌(Escherichia coli)，其特征在于，所述重组大肠杆菌是将来源于莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)的[FeFe]-氢酶基因hyd1和磷酸果糖激酶同工酶Ⅰ基因pfkA转入大肠杆菌DNA染色体上获得的；所述来源于莱茵衣藻的[FeFe]-氢酶基因hyd1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述磷酸果糖激酶同工酶Ⅰ基因pfkA的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌出发菌株为大肠杆菌BL21(DE3)菌株。

3.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌按以下方法构建：将SEQ ID No.1所示的[FeFe]-氢酶基因hyd1克隆到CRISPR-B质粒上，电转质粒到大肠杆菌感受态细胞中，筛选到阳性克隆后，消除质粒；再将SEQ ID No.2所示的磷酸果糖激酶同工酶Ⅰ基因pfkA克隆到CRISPR-B质粒上，电转质粒到已经敲入hyd1基因的大肠杆菌感受态细胞中，筛选到阳性克隆后，消除质粒，得到重组大肠杆菌。

4.一种权利要求1所述重组大肠杆菌在生物制氢中的应用。

5.根据权利要求4所述重组大肠杆菌在生物制氢中的应用，其特征在于，所述的应用是将重组大肠杆菌在产氢培养基中厌氧发酵制取氢气。

6.根据权利要求5所述重组大肠杆菌在生物制氢中的应用，其特征在于，所述的产氢培养基包括以下组分及重量份含量：胰蛋白胨0.8-2.6份、酵母提取物0.5-2.0份、氯化钠0.2-1.5份和碳源1.5-5.0份。

7.根据权利要求5所述重组大肠杆菌在生物制氢中的应用，其特征在于，所述的产氢培养基中碳源包括但不限于葡萄糖、蔗糖、淀粉、甘油，以及葡萄糖、蔗糖、淀粉、甘油的混合碳源。

8.根据权利要求5所述重组大肠杆菌在生物制氢中的应用，其特征在于，所述的产氢培养基中无需添加镍、钴、锰、铜、铝微量金属离子及亚硒酸钠和硼酸。

9.根据权利要求5所述重组大肠杆菌在生物制氢中的应用，其特征在于，所述重组大肠杆菌的厌氧发酵温度为20-40℃、pH值5-7.5，无需添加IPTG诱导剂。