[发明专利]用于单细胞测序的蜜蜂大脑单细胞悬液的制备方法在审
| 申请号： | 202210361708.4 | 申请日： | 2022-04-07 |
| 公开（公告）号： | CN114574424A | 公开（公告）日： | 2022-06-03 |
| 发明（设计）人： | 刘永军;柯俐;代平礼;陈夏桑 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院蜜蜂研究所 |
| 主分类号： | C12N5/07 | 分类号： | C12N5/07 |
| 代理公司： | 北京知呱呱知识产权代理有限公司 11577 | 代理人： | 杜立军 |
| 地址： | 100093 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 单细胞 蜜蜂 大脑 制备 方法 | ||
1.一种用于单细胞测序的蜜蜂大脑单细胞悬液的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
向蜜蜂大脑组织中加入蛋白酶溶液，充分分解后，获得蜜蜂大脑组织混合物；
所述蜜蜂大脑组织混合物经过滤后，收集大脑组织混合物滤液；
将所述大脑组织混合物离心后，获得沉淀物，将所述沉淀物重悬后，离心，获得的沉淀用缓冲液重悬，获得蜜蜂大脑单细胞悬液；
其中，所述蛋白酶溶液中含liberse TM酶和木瓜酶。
2.如权利要求1所述的用于单细胞测序的蜜蜂大脑单细胞悬液的制备方法，其特征在于，
所述蛋白酶溶液中，liberse TM酶的浓度为12-14U/ml。
3.如权利要求1所述的用于单细胞测序的蜜蜂大脑单细胞悬液的制备方法，其特征在于，
所述蛋白酶溶液中，木瓜酶的浓度为3-5mg/ml。
4.如权利要求1所述的用于单细胞测序的蜜蜂大脑单细胞悬液的制备方法，其特征在于，
所述重悬液为含质量百分数为9-11％％FBS的DMEM培养基。
5.如权利要求1所述的用于单细胞测序的蜜蜂大脑单细胞悬液的制备方法，其特征在于，
所述过滤采用40μm细胞筛过滤。
6.如权利要求1所述的用于单细胞测序的蜜蜂大脑单细胞悬液的制备方法，其特征在于，
所述大脑组织混合物离心条件为：4℃，300RCF，离心10min。
7.如权利要求1所述的用于单细胞测序的蜜蜂大脑单细胞悬液的制备方法，其特征在于，
所述蜜蜂大脑组织的分解条件为37℃水浴，10-30min，冷却至室温，同时上下颠倒蜜蜂大脑组织混合物。
8.如权利要求1所述的用于单细胞测序的蜜蜂大脑单细胞悬液的制备方法，其特征在于，
所述蜜蜂大脑组织分解前，先经PBS溶液清洗2-5次。
9.如权利要求1所述的用于单细胞测序的蜜蜂大脑单细胞悬液的制备方法，其特征在于，
所述缓冲液为质量分数为0.03-0.05％BSA的PBS溶液。
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