[发明专利]一种乙肝病毒样颗粒纳米载体及递药系统

权利要求书

1.一种乙肝病毒样颗粒纳米载体，其特征在于，所述载体具有如下所述的氨基酸序列：将乙肝核心蛋白HBc-170的第79-81位氨基酸替换为RGD序列，并采用连接肽使所述RGD的两端分别与所述HBc-170的第78和82位氨基酸相连构建得到。

2.根据权利要求1所述的乙肝病毒样颗粒纳米载体，其特征在于，所述载体的C端末尾还连接有聚组氨酸多肽。

3.根据权利要求1或2所述的乙肝病毒样颗粒纳米载体，其特征在于，所述连接肽的氨基酸序列为GTSGTSGSSGSGGT和/或GGSGSSGSTG。

4.一种递药系统，其特征在于，所述递药系统包括如权利要求1-3中任意一项所述的载体和包封于所述载体内部的药物。

5.根据权利要求4所述的递药系统，其特征在于，所述药物包括但不限于抗肿瘤药；所述抗肿瘤药为蒽环霉类药物，选自阿霉素、柔红霉素、吡柔比星、表阿霉素和阿克拉霉素及其药用衍生物中的任意一种或几种的组合。

6.根据权利要求4或5所述的递药系统的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：(1)使所述乙肝病毒样颗粒纳米载体与解离液在25℃下孵育2h；(2)向步骤(1)所得混合溶液中加入药物，轻微震荡，4℃孵育30min；(3)向步骤(2)所得混合溶液转移至分子量为3500Da的透析袋中，首先置于10％的聚合液中4℃过夜透析；(4)12h后将透析袋置于新的10％聚合液中继续透析2h；(5)将透析袋置于0％的聚合液中，4℃透析，透析过程中根据需要更换0％的聚合液，直至透析液澄清透明不再变为红色后停止透析，即得所述递药系统；所述解离液按照下述方法配制得到：27g NaCl，30g甘氨酸，480g尿素，150ml 1M Tris-HCL(pH＝8.0)，加去离子水搅拌溶解定容至1L；所述10％聚合液按照下述方法配制得到：9g NaCL，10g甘氨酸，100ml丙三醇，1M Tris-HCL(pH＝8.0)50ml，加去离子水搅拌溶解定容至1L；所述0％聚合液按照下述方法配制得到：称量NaCL 9g，甘氨酸10g，加入1M Tris-HCL(pH＝8.0)50ml，加去离子水搅拌溶解定容至1L。

7.根据权利要求6所述的递药系统的制备方法，其特征在于，所述药物为阿霉素，所述阿霉素的用量为所述乙肝病毒样颗粒纳米载体的质量的75％。

8.根据权利要求4或5所述的递药系统的纯化方法，其特征在于，采用DEAE离子交换层析对制备得到的所述递药系统进行纯化，包括如下步骤：

(1)缓冲液平衡柱子：用10倍柱体积含20mM Tris-HCl pH8.0的基液冲洗柱子，至流出液的pH与基液pH一致；

(2)上样：待紫外检测仪数值调零，将制备得到的递药系统以4mL/min的流速上样；

(3)洗脱液Ⅰ洗脱：用5倍柱体积的洗脱液Ⅰ冲洗柱子，收集洗脱峰即得纯化后的所述递药系统；所述洗脱液I含20mM Tris-Cl pH8.0；

优选的，所述纯化方法在洗脱液I洗脱后还包括下述步骤：(4)洗脱液Ⅱ洗脱：用5倍柱体积的洗脱液Ⅱ冲洗柱子，收集洗脱峰；所述洗脱液Ⅱ含20mM Tris-Cl pH8.0、400mMNaCl；(5)洗脱液Ⅲ洗脱：用5倍柱体积的洗脱液Ⅲ冲洗柱子；所述洗脱液Ⅲ为0.5M NaOH；(6)洗脱液Ⅰ洗脱：用5倍柱体积的所述洗脱液Ⅰ将pH平衡至pH8.0。

9.根据权利要求4或5所述的递药系统的纯度检测方法，其特征在于，采用HPLC进行检测，色谱柱为Ultrahydrogel 2000色谱柱；流动相为：20mmol/L PBS和150mmol/L NaCl；所述色谱柱的柱长为300nm，柱内径为7.8mm，柱温为25℃，流动相流速为0.6mL/min；检测波长为280nm和480nm。

10.根据权利要求4或5所述的递药系统的浓度检测方法，其特征在于，采用HPLC进行检测，色谱柱为C18柱；所述色谱柱为waters Tnature C18柱，柱长为250mm，柱内径为4.6mm，填料的粒径为5mm，柱温为25℃，检测器的检测波长为480nm。