[发明专利]一种串联双促溶标签及其应用

说明书

本发明提出了一种串联双促溶标签，包括促溶标签IF2DI和SUMO以及内含肽Mxe，本发明同时采用IF2DI和SUMO两个促溶标签组成双促溶表达标签，相对于单一的标签，可以更好促进目的蛋白的正确折叠并提高表达量，克服了单一标签蛋白折叠不好，促溶效果不理想的情况；且内含肽Mxe剪接后末端没有多余的氨基酸序列，提高了目的蛋白的纯度。

技术领域

本发明涉及蛋白表达纯化领域，尤其涉及一种串联双促溶标签及其应用。

背景技术

重组蛋白的原核表达目前已被广泛应用，其优点是能够在短时间内获得大量基因表达产物，所需成本相对低廉。为了能够进行后续的结构功能研究，所获得的重组蛋白必须可溶，稳定，正确折叠以及具有生物活性。原核表达的缺点是表达出来的蛋白缺乏翻译后加工，导致不正确的蛋白折叠形成不溶性包涵体，需要经过复杂的变性复性处理，很难表达大量的可溶外源蛋白。重组蛋白表达的可溶性成为首要解决的问题，促溶标签常被用于促进重组蛋白的可溶性表达。

促溶标签IF2DI来源于大肠杆菌，分子量18kDa，对蛋白的结构影响小，具有很高的亲水性，可在不同的宿主中表达，适用范围广，促溶效率高。小泛素样修饰蛋白SUMO来源于啤酒酵母，分子量11.5kDa，不但可以进一步提高融合蛋白的表达量，还能抗蛋白酶水解和促进目的蛋白正确折叠，提高重组蛋白的稳定性和可溶性。促溶标签IF2DI与SUMO串联融合表达可以显著促进目的蛋白的可溶性表达。但是促溶标签IF2DI与SUMO在表达CD138时，蛋白酶或凝血酶酶切促溶标签IF2DI与SUMO时，目的蛋白的末端常残留有多余的氨基酸序列，从而影响目的蛋白的纯度。

发明内容

有鉴于此，本发明提出了一种可以避免包涵体，同时也无需引入蛋白酶酶切，能够得到序列天然的目标产物的IF2DI和SUMO串联双促溶表达标签序列。

本发明的技术方案是这样实现的：一方面，本发明提供了一种串联双促溶标签，包括促溶标签IF2DI和SUMO以及内含肽Mxe。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述促溶标签IF2DI的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示；所述促溶标签SUMO的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述内含肽Mxe的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

另一方面，提供了一种串联双促溶标签在蛋白表达纯化中的应用，包括如下步骤：

S1，构建表达载体pET28a-IF2DI-SUMO-Mxe；

S2，将目的基因X插入表达载体pET28a-IF2DI-SUMO-Mxe的HindIII和XhoI酶切位点之间；

S3，将插入目的基因的表达载体pET28a-IF2DI-SUMO-Mxe-X转入表达菌株中，诱导表达；

S4，诱导后破碎菌株细胞，进行可溶蛋白的镍柱亲和纯化，得到纯合的目的蛋白。

在以上技术方案的基础上，优选的，步骤S3所述诱导表达采用IPTG作为诱导剂。

在以上技术方案的基础上，优选的，步骤S1的表达载体采用PCR及酶切连接方法，将IF2DI、SUMO和Mxe序列连接，并插入pET28a载体，获得pET28a-IF2DI-SUMO-Mxe载体。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述IF2DI促溶标签插入pET28a载体的方法为：人工合成IF2DI基因序列，并将该基因插入pET28a载体的NcoI和NdeI酶切位点之间，构建表达载体pET28a-IF2DI，并将载体转化到大肠杆菌DH5a感受态细胞中。