[发明专利]一种串联双促溶标签及其应用在审
| 申请号： | 202110851968.5 | 申请日： | 2021-07-27 |
| 公开（公告）号： | CN113637698A | 公开（公告）日： | 2021-11-12 |
| 发明（设计）人： | 雷苗;孙秋菊 | 申请（专利权）人： | 武汉菲恩生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/62;C12N15/66;C07K1/22 |
| 代理公司： | 武汉红观专利代理事务所(普通合伙) 42247 | 代理人： | 王昌亮 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 串联 双促溶 标签 及其 应用 | ||
1.一种串联双促溶标签，其特征在于：包括促溶标签IF2DI和SUMO以及内含肽Mxe。
2.如权利要求1所述的一种串联双促溶标签，其特征在于：所述促溶标签IF2DI的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述促溶标签SUMO的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述内含肽Mxe的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
3.一种串联双促溶标签在蛋白表达纯化中的应用，其特征在于：包括如下步骤：
S1，构建表达载体pET28a-IF2DI-SUMO-Mxe；
S2，将目的基因X插入表达载体pET28a-IF2DI-SUMO-Mxe的HindIII和XhoI酶切位点之间；
S3，将插入目的基因的表达载体pET28a-IF2DI-SUMO-Mxe-X转入表达菌株中，诱导表达；
S4，诱导后破碎菌株细胞，进行可溶蛋白的镍柱亲和纯化，得到纯合的目的蛋白。
4.如权利要求3所述的一种串联双促溶标签在蛋白表达纯化中的应用，其特征在于，步骤S1的表达载体采用PCR及酶切连接方法，将IF2DI、SUMO和Mxe序列连接，并插入pET28a载体，获得pET28a-IF2DI-SUMO-Mxe载体。
5.如权利要求4所述的一种串联双促溶标签在蛋白表达纯化中的应用，其特征在于，所述IF2DI促溶标签插入pET28a载体的方法为：人工合成IF2DI基因序列，并将该基因插入pET28a载体的NcoI和NdeI酶切位点之间，构建表达载体pET28a-IF2DI，并将载体转化到大肠杆菌DH5a感受态细胞中。
6.如权利要求5所述的一种串联双促溶标签在蛋白表达纯化中的应用，其特征在于，所述SUMO促溶标签插入pET28a载体的方法为：通过PCR技术扩增出SUMO的基因片段，并将其插入pET28a-IF2DI质粒的NdeI和BamHI酶切位点之间，位于IF2DI基因的下游，构建表达载体pET28a-IF2DI-SUMO，并将载体转化到大肠杆菌DH5a感受态细胞中。
7.如权利要求6所述的一种串联双促溶标签在蛋白表达纯化中的应用，其特征在于，所述内含肽Mxe插入pET28a载体的方法为：通过PCR技术扩增出内含肽Mxe蛋白的基因片段，并将其插入pET28a-IF2DI-SUMO质粒的BamHI和HindIII酶切位点之间，位于SUMO基因的下游，构建表达载体pET28a-IF2DI-SUMO-Mxe，并将载体转化到大肠杆菌DH5a感受态细胞中。
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